论文部分内容阅读
旋毛虫病是世界范围内普遍存在的一种严重的人畜共患寄生虫病。此病临床表现较复杂，诊断较为困难，因此，研制有效的旋毛虫病疫苗是防治该病的重要途径，但目前仍没有有效的疫苗问世。
本室通过用免疫血清筛选旋毛虫成虫cDNA文库得到Ts87基因，并成功的进行了Ts87重组蛋白(rTs87)的原核表达。前期研究已证明rTs87具有很好的免疫原性和免疫保护性，是一个很有前景的候选疫苗分子。为进一步研究rTs87的保护性，并探讨其作为疫苗应用于人类及动物的可行性，本实验选择了两种已经应用于临床试验的佐剂QuilA和IsA720，与rTs87免疫小鼠，研究其诱导产生的免疫反应以及免疫保护作用，并以传统弗氏佐剂(弗氏完全佐剂(FCA)联合弗氏不完全佐剂(FIA))和氢氧化铝佐剂作参照，并初步探讨其免疫保护性产生的机制。
本实验将原核表达的rTs87亲和纯化后，与上述各种佐剂免疫小鼠，并设单纯rTs87免疫组和生理盐水组为对照，观察其产生的保护性。实验分为六组：弗氏佐剂+rTs87组、ISA720-rTs87组、OuilA+rTs87组、氢氧化铝+rTs87组、生理盐水+rTs87组和对照组。首先将rTs87与各种佐剂充分混合，背部皮下免疫雌性BALB/c小鼠，两周免疫一次，共免疫三次，末次免疫一周后每只小鼠用400条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染。感染后45 d，断颈处死，取肌肉，用人工消化法收集全部肌幼虫，计数并计算减虫率。每次免疫前、攻虫感染前、攻虫感染后1、3、5W小鼠尾静脉取血，收集血清，ELISA检测血清中特异性抗体水平。结果显示弗氏佐剂、氢氧化铝、QuilA和ISA720分别与rTs87免疫小鼠后，获得了较好的保护性，减虫率分别为31.2﹪、39.1﹪、46.9﹪和50.3﹪，生理盐水+rTs87组也获得了16.8﹪的减虫率。血清ELISA检测结果显示，末次免疫后，各佐剂免疫组均引起较强的特异性rTs87抗体IgG反应，其中以佐剂QuilA和IsA720引起的抗体滴度最高。而且与生理盐水+rTs87组比较，各佐剂免疫组小鼠血清中抗体维持时间长，在攻击感染后5W抗体滴度仍在较高水平。上述结果表明，本次实验选用的佐剂均能够明显增强机体对rTs87的免疫反应，提高小鼠抗旋毛虫感染的保护性，其中佐剂QuilA和ISA720的效果最好。为了探讨不同佐剂与rTs87重组蛋白免疫小鼠获得的免疫保护性机制，末次免疫后3 d，每组取5只小鼠取脾细胞，放于96孔板中，37℃ 5﹪CO<,2>孵箱培养48 h后，ELISA法观察脾细胞细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4以及IL-10的分泌情况。结果显示：QuilA+rTs87组和ISA720+rTs87组小鼠Th1细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2细胞因子IL-10明显升高。同时ELISA检测小鼠血清中抗体亚型IgG1和IgG2a的水平，结果显示：QuilA+rTs87组和ISA720+rTs87组抗体IgG1和IgG2a的水平明显升高，能够诱导机体产生Th1/Th2混合型的免疫反应。进一步采用流式细胞术检测小鼠免疫后lW以及感染旋毛虫后1W，2W，3W和5W的T淋巴细胞亚群动态变化，CD4<+>/CD8<+>计数结果显示，上述各种佐剂与Ts87重组蛋白配伍免疫后小鼠没有发生明显的免疫抑制。
本实验研究了几种不同佐剂诱导的免疫反应，并初步探讨了免疫保护性产生的机制，结果显示，QuilA和ISA720安全性好，能够显著增强机体的免疫反应，提高小鼠抗旋毛虫感染的抵抗力，可以作为重组蛋白疫苗的良好佐剂进一步深入研究，为进一步研制旋毛虫病的疫苗奠定了一定的基础。