用电化学发光PCR方法快速、高灵敏度的检测植物病原菌和海产品中的食源性致病菌

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本文将聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与电化学发光分析方法结合起来,并用于病原菌检测。检测过程中采用生物素标记的探针与PCR产物杂交,可起到筛选特异性产物的作用,进而避免假阳性结果的产生。三联吡啶钉标记探针与PCR产物杂交,既可以起到进一步筛选目的片段的作用,又可与分析液中的三丙胺反应,产生光信号,从而被电化学发光仪所检测到。在两条引物的5’端分别连接一段特异性核酸序列,既提高了钌探针与特异性产物的杂交几率,又增强了样品检测信号,从而提高了信噪比。我们对检测条件进行优化,用该方法检测样品,实验结果表明:该方法可以从植物样品中准确地,高灵敏度地检测到病原菌成分的存在,且稳定性好、操作简单,克服了病原菌检测过程中普遍存在的灵敏度低,特异性低等问题。该方法的建立,无疑将对动、植物病原菌的早期诊断,切断感染源和控制其传播都有着重大的意义。
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