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腹膜转移是胃癌最常见的转移形式之一，是导致进展期胃癌根治手术失败的主要因素。研究发现，单层间皮细胞被覆于腹膜表面，间皮细胞结构和功能的完整性对癌细胞的粘附、定植起屏障作用。乳斑广泛存在于哺乳动物腹膜上，在腹膜转移的过程中，一部分肿瘤细胞先进入乳斑，在其中定植进而形成微转移灶，形成肿瘤相关的巨噬细胞(tumor associate macrophages，TAMs)。巨噬细胞本身呈旁路激活状态(alternative activation，M2 activation)，促进肿瘤发展，同时肿瘤细胞可以从外周血中趋化更多的幼稚单核细胞至癌灶周围，诱导其分化成为M2巨噬细胞，使整个的肿瘤微环境呈现慢性炎症状态。在胃癌腹膜转移过程中，乳斑内部及其周围伴有大量炎性细胞浸润，其中以M2巨噬细胞为主，本实验旨在研究胃癌早期腹膜转移微环境中TAMs与间皮细胞的相互作用，探讨TAMs损伤间皮细胞的方式及机制。
目的：
研究胃癌细胞对腹膜乳斑巨噬细胞的重塑作用，分析激活的腹膜乳斑巨噬细胞对间皮细胞的损伤作用及机制。
方法：
利用人正常胃腺上皮细胞系GES-1及人低分化胃癌细胞系SGC-7901分别与人单核巨噬细胞系THP-1共培养，诱导后者分化，建立肿瘤相关乳斑巨噬细胞(TAMs)体外模型;利用肿瘤相关乳斑巨噬细胞体外模型研究其对人腹膜间皮细胞HMR-sv5的损伤作用及分子机制。
结果：
TAMs模型的建立:巨噬细胞大体形态及扫描电镜显示与GES-1细胞共培养的巨噬细胞（T组）比与SGC-7901共培养的巨噬细胞(TA组)体积增大，富于细胞皱褶，伪足的数量及长度明显增加。流式细胞术检测TA组M1型巨噬细胞表面抗原的表达显著下调，其中CD80的表达由20.43％下调至5.03％; CD86的表达由35.82％下调至24.02％;MHC-Ⅱ的表达由8.69％下调至3.54％，而M2表型的表面抗原CD206的表达由1.04％上调至4.22％。免疫荧光共聚焦结果显示与流式结果一致，TA组M2型巨噬细胞表面抗原表达显著上升。
TAMs模型诱导间皮细胞凋亡:MTT结果显示，TAMs与间皮细胞共培养后（Sv5-TA组）细胞增殖停止，而Sv5-T组与Sv5-C组细胞均显示正常增殖能力，12小时各组细胞增殖率分别为Sv5-C组19.4％，Sv5-T组18.3％，Sv5-TA组为-8.7％(P＜0.05)，随着共培养时间延长Sv5-TA组凋亡趋势愈加明显（各组均P＜0.05）。AnnexinV-PI双染实验发现在共培养72小时后，SvS-TA组间皮细胞凋亡明显，三组细胞的凋亡率分别为Sv5-C组4.61％，Sv5-T组3.04％，Sv5-TA组为38.57％。Western蛋白免疫印迹各组间皮细胞凋亡相关蛋白表达情况，Sv5-TA组间皮细胞Cleaved-Caspase3，Cleaved-Caspase9及P2t的表达明显上调，而Sv5-C组与Sv5-T组之间表达无明显差异。
TAMs模型诱导间皮细胞成纤维转化:Western蛋白免疫印迹各组间皮细胞成纤维转化相关蛋白表达情况，Sv5-C组与SvS-T组间皮细胞上皮源性蛋白E-cad，CK-8的表达显著高于Sv5-TA组，而间质源性蛋白α-SMA及FN的表达显著低于Sv5-TA组，荧光共聚焦染色结果与western结果一致。
结论：
在腹膜转移过程中，肿瘤细胞重塑乳斑及其周围巨噬细胞使之发生表型功能转化，重塑的巨噬细胞诱导间皮细胞发生EMT和凋亡，导致细胞外基质成分增加、间皮下胶原暴露，为癌细胞粘附侵袭腹膜提供了良好的“土壤”环境，是腹膜微环境改变的始动因素之一。