【摘 要】
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目的:该实验旨在研究SNP敏感性纳米级复合分子开关在基因组SNP检测中的特异性及应用.方法:选择原发性高血压病人及正常人群各30人作为研究对象,于其肘正中静脉采血5ml,置于10
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目的:该实验旨在研究SNP敏感性纳米级复合分子开关在基因组SNP检测中的特异性及应用.方法:选择原发性高血压病人及正常人群各30人作为研究对象,于其肘正中静脉采血5ml,置于10ml试管中,每管加0.5ml肝素抗凝,-20℃保存备用.采用经典的酚/氯仿法提取基因组DNA,0.8％琼脂糖凝胶电泳鉴定,紫外分光光度仪测定OD<,260/280>值,分管,-20℃保存备用.从dbSNP找出神经性耳聋相关基因GJB3中C→T突变点及四个原发性高血压相关基因SNP位点,即Endothelin 5370G/T,ACE 1987693C/T,AGT 699C/T和RENBP 2269371C/T,根据Genebank中的基因序列,利用BLAST进行同源性比对,按照引物设计原则,自行设计引物.应用SNP敏感性分子开关检测神经性耳聋基因GJB3中C→T点突变,分析其在检测单基因遗传病点突变中特异性;在50℃,55℃,58℃的退火温度下,分别使用Taq酶与Pfu酶介导的3硫化修饰特异性引物延伸反应分析基因组DNA中的SNP位点,研究SNP敏感性分子开关在基因组SNP分析中的特异性及可靠性;用梯度PCR从49℃到61.5℃大范围的退火温度分析Taq酶与Pfu酶介导的3硫化修饰特异性引物延伸反应在SNP分析中的特异性及可靠性,以研究SNP敏感性分子开关进行高通量平行分析SNP的潜在可能性;PCR产物送至Sangon测序.结论:(1)SNP敏感性分子开关是一种特异性强,可靠性高的可用于基因组SNP分析的新方法;(2)在大范围的退火温度下,SNP敏感性分子开关能准确识别基因组中SNP位点.
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