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脂肪酸结合蛋白(Fatty Acid Binding Proteins,FABPs)属于脂结合蛋白超家族成员,是一类分子量较小而对脂肪酸有高亲和力的蛋白质,广泛存在于脊推动物和非脊椎动物细胞质中。FABPs在细胞中的主要作用是进行细胞内脂肪酸的运输。它们与脂肪酸结合将其运输到脂肪酸氧化的位置、脂肪酸脂化成甘油三酯或磷脂的位置,或者进入细胞核内发挥其可能的调控功能。因此FABPs对脂类代谢具有重要的调控作用。在鸡中L-FABP及Lb-FABP基因已被分离出并进行了相关的研究,而在鸭中却只克隆了Lb-FABP基因部分的cDNA序列及部分相关研究。本研究以鸡肝脏脂肪酸结合蛋白(Liver Fatty Acid Binding Protein,L-FABP)基因及野鸭(Mallard)肝脏基础型脂肪酸结合蛋白(Liver basic type Fatty Acid Binding Protein,Lb-FABP)基因序列为基础,通过比较基因组学和生物信息学等方法克隆了仙湖鸭L-FABP基因及Lb-FABP基因序列;采用半定量RT-PCR方法研究了L-FABP基因及Lb-FABP基因的组织表达特性。主要研究结果如下:
1、通过比较基因组学、生物信息学方法及RACE技术,获得了仙湖肉鸭Lb-FABP基因全长547bp的cDNA序列。分析发现,该序列包括97bp长的5’非翻译区(5’UTR)和69bp长的3’非翻译区(3’UTR),开放阅读框(ORF)长381bp,共编码126个氨基酸;与鸡的氨基酸的同源相似性为97.0%。
2、通过生物信息学方法分析,发现鸭Lb-FABP基因结构由4个外显子和3个内含子构成;设计基因特异性引物进行PCR扩增,获得了鸭Lb-FABP基因的内含子1、2、3基因组序列,分别长为991bp、291bp、718bp。
3、首次克隆并鉴定了鸭L-FABP基因的部分cDNA序列。分析发现该序列由长度分别为111bp、172bp、88bp的外显子1、2、3组成。
4、设计基因特异性引物进行PCR扩增,获得了鸭L-FABP基因内含子1、2、3的基因组序列,长度依次为734bp、1607bp、522bp。
5、半定量RT-PCR结果表明鸭Lb-FABP与L-FABP基因在所检测的16个组织中均有表达;Lb-FABP在肝脏组织中的表达特性明显高于其他组织,而L-FABP在肝脏、小肠、下丘脑三种组织中的表达特性明显高于其他组织。