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我国具有丰富的桑树资源,桑叶自古以来就是一种优良的中药材,含有多种生物活性成分。桑叶中多糖含量较多,对桑叶多糖进行深入研究,对于桑树资源的综合开发和利用具有十分重要的意义。本文以广东桑为主要材料,对桑叶多糖的提取、纯化、抗氧化及降血糖活性等进行了较为系统的研究。试验主要结果如下:
1.以广东桑树资源为主,测定了100余个品种的桑叶多糖含量,发现不同桑种、品种间桑叶多糖含量存在显著差异。广东桑桑叶多糖含量显著高于白桑(P<0.05)和鲁桑(P<0.01),在68个广东桑品种中,多糖含量相差2.5倍之多,其中含量最高的是曲马2号,达到31.05 mg/g。季节和染色体倍数对桑叶多糖含量也有一定影响,季节的影响是秋季>夏季>春季,倍体影响是多倍体>二倍体。以上结果为桑叶资源在药食领域开发过程中材料的最优化和标准化选择提供了依据。
2.采用二次回归正交旋转组合设计确定了热水浸提法提取桑叶多糖的最佳工艺条件为提取温度85℃,提取时间90 min,料液比1:35,pH 7.5,在此条件下桑叶多糖提取率为4.53%;通过Box-Benhnken中心组合试验和响应面分析,确定微波辅助法提取桑叶多糖的最优工艺为微波时间10 min,微波功率320 w,料液比1:45,在此条件下桑叶多糖提取率为5.45%。与热水浸提法相比,微波辅助提取法大大缩短了提取时间,提高了桑叶多糖的提取率和纯度,而且降血糖动物试验表明,微波辅助提取法所得桑叶多糖降血糖效果更好,表现出了更强的生物活性,是一种更为优良的桑叶多糖提取方法。
3.与三氯乙酸法相比,Sevag法脱蛋白更为理想,用Sevag法脱蛋白4次时,桑叶多糖含量与蛋白质含量的比值达到最大值,并且蛋白质浓度不再降低,表明桑叶多糖可能是一类糖蛋白;对D101大孔吸附树脂纯化桑叶多糖的工艺优化表明,当上样液pH值为7.45、浓度为1.5 mg/mL、上样流速为2 mL/min,并用0.1 mol/LNaOH洗脱时,D101大孔吸附树脂对桑叶多糖的纯化效果最好,纯化后桑叶多糖的纯度由23.8%提高到37.1%,并且多糖颜色变浅,水溶性增大。
4.抗氧化试验表明,桑叶多糖是一种优良的OH·清除剂,能显著降低H<,2>O<,2>诱导的小鼠肝脏MDA的形成和积累。桑叶多糖可以提高四氧嘧啶糖尿病小鼠机体的SOD活性,极显著抑制糖尿病小鼠的脂质过氧化作用,提示桑叶多糖可能是通过清除氧自由基及抗脂质过氧化作用来降低血糖的。动物实验还发现,桑叶多糖能明显改善糖尿病小鼠消瘦的症状,调节糖尿病小鼠的饮食水平,并在一定程度上增强糖尿病小鼠的免疫力,修复糖尿病小鼠的胰岛细胞损伤,增加肝糖原含量,改善肝糖代谢紊乱,推测桑叶多糖对治疗四氧嘧啶型糖尿病小鼠具有多项调节作用。