不同宫颈鳞癌细胞系中S100A9的表达及定位

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目的:在本课题组前期研究中发现S100A9蛋白与宫颈鳞癌的癌变相关,但是S100A9对宫颈鳞癌发生发展及生物学行为的影响尚未明确。通过检测宫颈鳞癌细胞系SiHa、C33A、Caski、MS751中S100A9 mRNA、S100A9蛋白及分泌型S100A9蛋白的表达水平,筛选出S100A9相对高表达和低表达的细胞系,为进一步研究S100A9过表达和抑制其表达后对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响做前期工作。  方法:(1)人宫颈鳞癌细胞系SiHa、C33A、Caski及MS751的培养及细胞鉴定。(2)采用免疫细胞化学染色检测人宫颈鳞癌细胞系SiHa、C33A、Caski及MS751中S100A9蛋白的定位。(3)采用Western blot检测人宫颈鳞癌细胞系SiHa、C33A、Caski及MS751分别培养0h、12h、24h、36h、48h及72h时S100A9蛋白的表达水平。(4)采用RT-PCR检测人宫颈鳞癌细胞系SiHa、C33A、Caski及MS751中S100A9 mRNA的水平。(5)采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人宫颈鳞癌细胞系SiHa、C33A、Caski及MS751分别培养12h、24h、36h、48h及72h时,上清中分泌型S100A9蛋白的表达水平。  结果:(1)免疫细胞化学染色方法发现S100A9蛋白大部分表达在人宫颈鳞癌细胞的胞浆中,少部分表达在细胞核。(2) Western blot法检测发现:S100A9蛋白在Caski细胞中的表达最高(2.60±0.38),而在C33A细胞中的表达最低(1.54±0.32),差异有统计学意义(P<0.05);24h、36h、48h及72h时Caski细胞内S100A9蛋白的相对表达量均高于其他3种细胞(P<0.05),而C33A细胞内S100A9蛋白的相对表达量均低于其他3种细胞(P<0.05),进一步说明S100A9蛋白在Caski中的表达相对较高,而在C33A中的表达相对较低。(3)S100A9 mRNA在人宫颈鳞癌细胞系Caski中的表达最高(0.86±0.07),而在人宫颈鳞癌细胞系C33A中的表达最低(0.54±0.03),差异有统计学意义(P<0.05)。(4)除Caski细胞于培养72h时可检测到分泌型S100A9蛋白含量(46pg/ml)外,其他细胞的所有时间点及Caski细胞除72h外的时间点均未检测到分泌型S100A9蛋白。  结论:(1) S100A9蛋白表达在人宫颈鳞癌细胞的胞浆及胞核中,以细胞浆为主。(2) S100A9蛋白在Caski细胞中的表达高于其他3种细胞,但在C33A中的表达低于其他3种细胞。(3) S100A9 mRNA在Caski细胞中的表达高于其他3种细胞,但在C33A中的表达低于其他3种细胞。(4)分泌型S100A9蛋白在人宫颈鳞癌细胞系SiHa、C33A、Caski及MS751中的表达少,提示S100A9的表达主要在细胞内。(5) Caski细胞最适合进行S100A9干扰使其低表达,而C33A细胞最适合S100A9病毒转染使其高表达,观察S100A9表达改变前后对细胞生物学行为的影响。
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