结状神经节髓鞘化Ah-神经元中Nav1.9通道的分子生物学研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chaocui41
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目的:1、以分子生物学的手段鉴定髓鞘化Ah-神经元是否表达Nav1.9(持续开放的、对TTX抵抗的电压依赖型钠通道),以及在该神经元的分布;2、研究Nav1.9在大鼠结状神经节不同种类神经元之间、性别之间的表达是否存在差异,以及去除卵巢对其表达的影响,从而探讨Nav1.9通道与神经元兴奋性之间的关系。  方法:实验选用SD大鼠分为四组,分别为:①正常雌性大鼠组;②4周去卵巢模型组;③12周去卵巢模型组;④正常雄性大鼠组。四组大鼠均在成长到14周时分离结状神经节;采用HCN1(标记髓鞘,鼠抗)和Nav1.9(兔抗)双重抗体标记的荧光免疫组织化学方法,结合共聚焦技术,观察Nav1.9在不同组间的表达;以及Nav1.9在Ah-神经元分布的情况:采用Real time RT-PCR方法,检测不同组间结状神经节中Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9通道基因表达的情况;采用Western blot技术,检测不同组间结状神经节中Nav1.9通道蛋白表达的情况。  结果:1、免疫组化:结果证明大鼠髓鞘化Ah-型神经元表达Nav1.9通道,该通道主要分布在细胞膜。2、基因表达:(1)Nav1.7通道表达:与14周正常雌性组比较,4周去卵巢模型组、12周去卵巢模型组、正常雄性组Nav1.7通道的mRNA表达没有显著性差异(P>0.05,n=6);(2)Nav1.8通道表达:与14周正常雌性组相比,12周去卵巢模型组Nav1.8通道mRNA表达量降低了21.2%,具有显著性差异(P<0.05,n=6)。(3)Nav1.9通道表达:与14周正常雌性组比较,4周去卵巢模型组、12周去卵巢模型组和正常雄性组Nav1.9通道mRNA表达量比正常组分别降低了37.7%、38.0%和38.4%,具有显著性差异(P<0.05,n=6);3、蛋白表达:与14周正常雌性组比较,4周去卵巢模型组、12周去卵巢模型组和14周正常雄性组的Nav1.9通道蛋白表达量明显降低,分别为26.6%、42.2%、29.7%(P<0.05,n=10)。  结论:1、结状神经节髓鞘化Ah-型神经元表达Nav1.9型离子通道,主要分布在Ah-型神经元的细胞膜;2、去除卵巢使Nav1.9通道表达显著降低,这一结果可能是导致髓鞘化Ah-型神经元在去除卵巢后兴奋性下降的主要原因之一。
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