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目的:重组及表达对氧磷脂酶paraoxonase-1(PON1)融合蛋白、血清淀粉样蛋白serum amyloid A1(SAA1)融合蛋白、C-reactive protein C反应蛋白(CRP)融合蛋白,为制备相应单克隆抗体作准备,为进一步研究开发冠心病的临床诊断试剂盒奠定基础。 方法:以成人肝cDNA文库为模板,应用PCR技术扩增出PON1基因、SAA1基因、CRP基因,将其分别与带有HIS标签的PET-32a及GST标签的PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆并测序鉴定。进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达PON1融合蛋白、SAA1融合蛋白、CRP融合蛋白(分别含有HIS、GST-Tag),并进行SDS-PAGE分析。 结果:以成人肝cDNA文库为模板经PCR扩增后得到三条大小分别为234bp、315bp、624bp的DNA片段,经测序鉴定分别为PON1基因序列、SAA1基因序列、CRP基因序列;并在大肠杆菌中实现了包涵体形式的表达,经SDS-PAGE分析分别为为PON1融合蛋白、SAA1融合蛋白、CRP融合蛋白。 结论:采用原核表达方法可获得高纯度的PON1融合蛋白、SAA1融合蛋白、CRP融合蛋白,为进一步制备相应的单克隆抗体和开发冠心病诊断试剂盒打下基础,为冠心病的诊断开辟新途径。