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精子低温保存技术是大规模人工繁殖的关键技术之一,保存时间和精子活性是最重要的两项指标。针对黄颡鱼精子的授精能力、抗冻剂保护、保存液成分等问题,本文对黄颡鱼精子活力与授精能力之间关系、非渗透性抗冻剂对黄颡鱼精子低温保存的作用、保存液成分对黄颡鱼精子活力的影响以及黄颡鱼精子低温保存技术对其它淡水鱼类精子低温保存的适用性进行了研究,结果如下:
(一)人工繁殖,通常以精子活力来表示精子质量,研究中缺少精子活力与授精能力关系,本文通过人工授精实验指出:黄颡鱼苗种繁育中,精子质量>50%活力具有有效授精率;精子质量>30%活力具有最低授精率要求;精子质量低于30%在苗种繁殖中已经无意义。
(二)证实牛血白蛋白、海藻糖在黄颡鱼精子0℃低温保存中作为保护剂的有效作用,提出以牛血清白蛋白和海藻糖替代二甲基亚砜改进黄颡鱼精子0℃低温保存技术:
0℃、2.0×104IU青霉素/ml精液、10%牛血清白蛋白(V/V);
0℃、2.0×104IU青霉素/ml精液、6%海藻糖(质量分数)。
(三)通过实验证明:过低、过高的盐浓度都对精子活力具有抑制作用,当NaCL在0.4%-0.5%之间时,黄颡鱼精子全部被激活;
过高和过低pH值不利于黄颡鱼精子保存。当保存液pH值在7.4-7.7的范围内对黄颡鱼精子活力保护较好,pH值=7.6黄颡鱼精子活力保护效果最好,室温保存2h后仍能保持黄颡鱼精子100%活力。
故推荐黄颡鱼精子保存液范围:pH=[7.4-7.7],以pH=7.6最佳。
(四)针对苗种繁育,编写黄颡鱼精子0℃低温保存操作流程:{雄性亲本培养→精子催熟→精子采集→加入精子保存液→(便携保存)→0℃保存→激活雌性亲本培养→卵子催熟→卵子采集→人工授精→孵化}此流程普遍适用于淡水鱼类精子0℃低温保存操作以及人工繁殖。
(五)精子低温短期保存技术是生产实践中大规模人工繁殖的关键技术之一。本文通过对鲤科鱼类精子低温保存验证,证明了黄颡鱼精子0℃低温保存技术运用于一般鲤科鱼类精子低温保存的可行性。