苍术黑斑病病原学研究

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苍术黑斑病是苍术上一种重要病害,严重影响了苍术的质量和产量。查阅文献资料,国内外对苍术的药用价值研究比较多,但是对此病还未有系统研究报道。本研究旨在确定引起苍术黑斑病的病原,了解病菌的群体遗传变异及病菌生物学特性。 从湖北省孝昌县苍术种植基地的发病植株叶片上分离得到菌株,根据柯赫氏法则对分离自发病叶片的菌株进行致病性测定,然后描述了寄主发病叶片以及PCA培养基上分生孢子、分生孢子梗及喙的形态,测量其大小,观察分生孢子链的形状。经过致病性测定、形态学鉴定及病原菌的rDNA-ITS序列分析研究,鉴定引起苍术黑斑病的病原为Alternaria tenuissima和Alternaria solani。病原菌生物学特性研究结果表明,病菌菌丝在15~35℃都能生长,最适温度为25℃;pH在4~11都能生长,最适pH值为6.0~7.0;在Czapek培养基上,病原菌以葡萄糖为碳源生长最好,以硝酸钾为氮源生长最佳。A.tenuissima和A.solani对菊科植物苍术叶片和茄科植物番茄、辣椒及茄子叶片都有致病性。A.tenuissima对禾本科植物小麦叶片也有致病性,但对玉米叶片无致病性;A.solani对禾本科植物小麦和玉米叶片均无致病性。30%爱苗EC和10%世高WG对菌丝生长有很好的抑制效果,而75%代森锰锌WG和75%百菌清WG对菌丝生长的抑制效果较差。 通过电泳谱带比较和谱带条数统计分析,从60个随机引物中筛选出8个最佳引物,并进一步对从湖北孝昌和英山发病植株上分离得到的40株病原菌进行RAPD扩增。聚类分析表明,在0.48相似系数水平,以A.solani为代表的链格孢大孢子种菌株和以A.tenuissima为代表的链格孢小孢子种菌株被区分为两个种群,并且孝昌和英山菌株都存在A.tenuissima和A.solani。在以A.solani为代表的链格孢大孢子种组群中,在0.71的相似系数水平,可以将该组群划分为孝昌县黑斑病菌株的地理亚组群和英山县黑斑病菌株的地理亚组群。在以A.tenuissima为代表的链格孢小孢子种组群中,在0.64相似系数水平上,可以将该组群划分为孝昌县黑斑病菌株的地理亚组群和英山县黑斑病菌株的地理亚组群。这表明RAPD分析方法适合于链格孢种间亲缘关系的研究。RAPD分析也反映了苍术黑斑病菌存在丰富多态性。
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