颠茄(Atropa belladonna L.)组织培养与新种质选育研究

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颠茄(AtropabelladonnaL.)为茄科(Solanaceae)颠茄属(AtropaL.)植物,多年生草本,全草入药,为常用中草药之一。全草含颠茄碱、莨菪碱以及东莨菪碱等,有抗胆碱等功效,可用于镇静、麻醉、止痛、镇痉、减少腺体(例如涎腺和汗腺)分泌,以及扩大瞳孔等。20世纪90年代,东莨菪碱应用于戒毒,取得了显著疗效。 目前,国内对颠茄的组织培养和新种质选育研究很少,本试验通过对颠茄组织培养的系统研究,以期为颠茄的工厂化育苗提供参考数据;同时在组织培养的基础上,结合染色体工程技术对选育颠茄多倍体新种质的技术和方法进行了研究,以期找到最佳的诱导方法,为颠茄的倍性育种奠定基础,并期望获得高产优质的颠茄新种质。 颠茄组织培养的研究表明:外植体最佳的消毒方式为:先以中性洗涤剂浸泡10min,再用自来水冲洗30min,然后用0.1﹪HgCl2消毒6min(取材为12月份),最后用无菌水冲洗3~5次接入培养基中,此时芽诱导率达100﹪,污染率为0.0﹪。颠茄初代培养诱导芽分化的最适培养基为MS+0.7mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+sucrose3.0﹪;继代增殖时芽分化的最适培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+sucrose3.0﹪。颠茄组培时初代芽的生根较困难,必须添加一定浓度的激素才能生根,最适的生根培养基为MS+0.2mg/LIBA+sucrose2.0﹪,生根率可达100﹪。在生根试验中发现,继代数和继代天数对颠茄组培苗的生根有一定影响:继代数大于10时,生根变得非常容易,在基本的MS培养基上既可生根。继代15~20d时,颠茄组培苗较易生根;当继代时间在20~55d之间时,组培苗不易生根;但当继代时间为90d时,组培苗又极易生根,在一般的MS培养基上既可生根。 在颠茄组织培养的基础上,利用秋水仙素溶液对其进行了多倍体诱导,分别采用了浸泡法和混培法,其中浸泡法的处理材料为颠茄的茎尖和腋芽,结果表明:两种诱导方法中浸泡法较佳,两种材料的诱导效果以腋芽为佳。以0.10﹪的秋水仙素溶液浸泡处理腋芽36h时,诱变效果最佳,诱导率可达45﹪。 对获得的不同倍性颠茄植株进行了外部形态、细胞学和生物学相关性状的比较观察,结果表明:在外界环境相同的条件下,同一生长阶段的二十四倍体颠茄和十二倍体颠茄在叶片形状上存在明显的差异。二十四倍体颠茄植株叶片的长度、宽度和厚度均大于其十二倍体植株:长度、宽度、厚度分别为十二倍体的127.8﹪、179.5﹪、140.0﹪,叶形指数变小,为二倍体的71.0﹪,经配对样品T值检验表明,二十四倍体与十二倍体叶片的长、宽、厚以及叶形指数间差异均达极显著水平。二十四倍体和十二倍体颠茄气孔特性比较表明:二十四倍体叶片的保卫细胞明显增大,其长度、宽度分别为十二倍体的150.2﹪和124.2﹪,保卫细胞内叶绿体数明显增多,为十二倍体的183.6﹪;气孔增大,长度、宽度分别为十二倍体的129.5﹪和150.1﹪,而密度下降,仅为十二倍体的51.4﹪,经配对样品T值检验表明,两者气孔密度间差异达极显著水平。对不同倍性颠茄组培苗相对生长率的比较表明:处于相近的生长阶段和相同环境条件下,二十四倍体颠茄较十二倍体的相对生长率高,最多高出10﹪,平均高出4.6﹪。 利用电导法进行了颠茄二十四倍体与十二倍体抗性比较研究,主要研究了0℃和40℃逆境胁迫后,二十四倍体和十二倍体电导率和电导渗透率的变化。结果表明:在经过0℃和40℃逆境胁迫后,颠茄二十四倍体的电导率和电解质外渗率均显著高于于十二倍体。在0℃温度处理下,二十四倍体的电导率平均值为103.66μS·cm-1,十二倍体的为60.131μS·cm-1,差异达极显著水平;在0℃下二十四倍体电解质外渗率为13.74﹪,十二倍体为7.55﹪,差异达极显著水平;在40℃温度处理下,二十四倍体的电导率平均值为88.36μS·cm-1,而十二倍体的为53.40μS·cm-1,差异达极显著水平;两者间电解质外渗率,二十四倍体为9.58﹪,十二倍体为5.68﹪,差异达极显著水平。研究表明二十四倍体颠茄植株的抗逆性较十二倍体弱。
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