【摘 要】
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目的:检测粪、屎肠球菌毒力基因分布的差别;构建肠球菌溶血素cylLl,cylA重组子,体外表达cylLl,cylA蛋白。为研究肠球菌毒力机制以及疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank上
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目的:检测粪、屎肠球菌毒力基因分布的差别;构建肠球菌溶血素cylLl,cylA重组子,体外表达cylLl,cylA蛋白。为研究肠球菌毒力机制以及疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank上的肠球菌基因序列,合成cylA、cylLl、gelE、efaA引物,PCR检测四种基因在临床分离菌株中的分布情况。PCR扩增cylLl,cylA基因片段,连接到pET42a载体上,转化到Top10检测阳性克隆,鉴定测序,重组质粒转化到BL21(DE)菌株,IPTG诱导表达肠球菌cylLl,cylA,SDS-PAGE分析cylLl, cylA蛋白,Western Blot进行鉴定。结果:1.113株临床分离肠球菌cylA,cylLl,gelE,efaA基因检出率分别是53.98%、52.21%、63.72%、64.60%。其中92株粪肠球菌cylA,cylLl,gelE,efaA基因检出率分别是58.7%、57.6%、70.7%、73.9%;21株屎肠球菌cylA,cylLl,gelE,efaA基因检出率分别是33.3%、28.6%、33.3%、23.8%。粪肠球菌、屎肠球菌各毒力基因检出率经卡方检验,差别有显著性。2.构建PET42a-cylLl,cylA重组子,体外表达cylLl,cylA蛋白,通过SDS-PAGE分析、Western Blot鉴定为cylLl,cylA融合蛋白。结论:1.粪肠球菌毒力基因检出率比屎肠球菌高。2.在pET42a系统中成功表达了cylA,cylLl融合蛋白,为进一步大规模表达和纯化cylA,cylLl蛋白,研究其生物学活性及临床诊断治疗奠定基础。
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