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河豚毒素（Tetrodotoxin，TTX）是一种毒性很强的非蛋白类海洋生物活性物质，主要存在于河豚鱼体内。该毒素理化性质稳定，能耐高温及日光暴晒，家庭的烹饪过程几乎不破坏其毒性。TTX中毒后缺乏有效的治疗手段，病死率很高，食用或误食河豚而引起的TTX中毒历年来是我国（尤其是沿海地区）食物中毒的主要死因。为此人们对TTX的检测技术进行了多方面的研究，建立了多种检测方法如小鼠生物实验法、荧光法、紫外分光光度法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。在这些方法中尤以ELISA方法最适于基层推广开展，但推广检测TTX的ELISA方法必须首先解决TTX标准品的来源问题，目前国际上TTX标准品价格昂贵而且TTX属于生物战剂遭到国际禁运，此外TTX是剧毒物对实验操作人员也存在安全隐患，为了解决TTX标准品来源紧张和保护操作者的安全，本研究在制备出的抗TTX单克隆抗体基础上，根据Jeme提出的免疫网络理论，利用抗抗TTX单克隆抗体独特型抗体Ab2B型可以模拟抗原，可在体外与抗TTX单克隆抗体特异性相结合，同时抑制抗TTX单克隆抗体与TTX相结合的原理，用抗独特型抗体Ab28替代TTX毒素标准品，应用于ELISA检测。
研究中采用无花果蛋白酶消化抗TTX单克隆抗体，凝胶过滤色谱法分离酶切产物纯化Fab’片段，经间接非竞争ELISA测定Fab’片段的亲和力常数为7.212×10<,－><10>mol／L，完整抗体分子的亲和力常数为9.432×10<－10>mol／L。Fab’片段经间接竞争ELISA测定TTX20％抑制率为31.33ng／mL，50％抑制率为125.89ng／mL，80％抑制率为524.81ng／mL。抗TTX单克隆抗体经相同方法测定后TTX20％抑制率为26.20ng／mL，50％抑制率为151.40ng／mL，80％抑制率为907.08ng／mL。由此可见，抗休经酶消化后得到的Fab’片段不仅对TTX的特异性提高了而且增强了对TTX的竞争。
抗TTX单克隆抗体的Fab’片段免疫日本大儿白兔一个半月后产生了抗抗TTX单克降抗体独特型抗体（antiidiotypic antibody，AID），经ELISA，小鼠生物实验鉴定为抗独特型抗体Ab<,2B>。AID替代游离念TTX标准品，在间接竞争ELISA反应中20％的抑制率为196.00ng，相当于TTX标准品的1.29ng，50％的抑制率为445.50ng，相当于TTX标准品6.22ng，80％的抑制率为1.03μg，相当于TTX标准品30.00ng。TTX作为竞争抗原时，线性范围1～50ng，AID作为竞争抗原时，线性范围0.18～1.8μg。AID作为ELISA检测中TTX标准品的替代品，与其它毒素的单克隆抗体的交叉反应率均小于1％，与抗TTX单克隆抗体的交叉反应率为100％，完全可以在ELISA检测中替代TTX标准品，缓解了标准品匮乏的困难。
在获得AID的前提下，建立了检测TTX的无毒ELISA方法。对河豚鱼肉作100ng/ml和200ng/ml 2个加标浓度，5个平行样的回收率试验，分别利用TTX和AID两者的浓度的对数关系和浓度关系推导TTX的浓度，回收率在81.84％～113.57％之间，平均回收率分别为90.68％，91.59％，105.55％，96.99％，变异系数分别为6.80％，7.25％，6.30％，5.26％。