大豆异黄酮甙元制备及食品中总大豆异黄酮评价方法研究

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大豆异黄酮(SoyIsoflavone)是豆科植物生长过程中形成的一类具有特殊生理功能的次生代谢产物,由九种糖甙和三种甙元构成。前人研究多集中于总大豆异黄酮活性的研究,而对甙元研究资料较少。甙元形式的异黄酮比糖甙形式的异黄酮具有更高的生物活性,人体以甙元形式吸收入血,为获得甙元形式异黄酮试验材料及甙元产品,甙元制备成为研究热点,本研究对甙元的制备方法、条件进行了系统的探讨。首次以大豆胚芽为原料,经过水提取工艺、AB-8树脂吸附梯度洗脱纯化工艺、盐酸水解工艺完成了大豆异黄酮甙元的制备并对甙元分离纯化工艺进行摸索,主要结论如下: 1、通过单因素试验和正交试验首次确定大豆胚芽中大豆异黄酮水浸提法条件为:采用未粉碎,未脱脂大豆胚芽在微沸状态下一次提取时间为0.5h,料液比为1∶10,二次提取时间为0.25h,料液比为1∶5。并采用离心法脱脂,乙醇沉淀与等电点沉淀结合方法去除蛋白质获得大豆异黄酮提取液。 2、首次采用大豆胚芽的大豆异黄酮水提取液经AB-8大孔树脂柱层析,以B溶剂→30%A溶剂→70%A溶剂一次上柱洗脱,B溶剂→40%A溶剂→70%A溶剂二次上柱洗脱的工艺流程,可以实现较高纯度大豆异黄酮(41.62%)的获得。 3、通过单因素试验和正交试验确定HCl将大豆异黄酮糖甙水解成甙元的最佳条件为水解酸液的浓度为2.5mol/L、水解温度为90℃,水解时间为3h。 4、首次阐明大豆异黄酮甙元水解液可经AB-8大孔树脂层析柱以H2O→80%乙醇溶液直接洗脱,去除盐酸水解过程中产生的水解糖及盐;聚酰胺柱层析以20%乙醇、40%和80%乙醇溶液梯度洗脱不能实现甙元分离及纯化;以氯仿—甲醇-20%冰乙酸(7∶3∶1)为展开剂,薄层层析可以鉴定Gen和Den;以氯仿—甲醇-20%冰乙酸(7∶3∶1)为洗脱剂,硅胶G柱层析未实现Gen和Den的分离,却提高产品纯度为49.24%。 另外,在大豆异黄酮研究中,由于不同大豆食品及制品所含糖甙与甙元组分比例的差异而造成总大豆异黄酮含量的争议,因此需要一种准确、简便易行的评价方法的确立,以研究大豆食品中大豆异黄酮的真正含量。本研究首次对发酵与非发酵大豆食品中的大豆异黄酮构成及评价方法进行了探讨,主要结论如下: 1、发现发酵大豆食品及制品中以甙元形式的大豆异黄酮为主要成分,紫外分光光度法测定总大豆异黄酮含量时,直接测定,无需校正。 2、发现非发酵大豆食品及制品中以糖甙形式的大豆异黄酮为主要成分,紫外分光光度法测定总大豆异黄酮含量时,不能直接测定,必需进行校正,其校正系数为1.530。
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