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本课题是在已研制成功的非阿片类镇痛中药基础上，进一步研究非阿片类中药的镇痛机理。痛必定注射液是导师根据中医理论，密切结合临床，研制成的具有有活血化瘀，行气止痛功效的中药针剂。痛必定的镇痛效果良好，但其作用的机理仍需进一步研究。本次研究分为三个部分：
实验一，痛必定注射液镇痛效果及其作用受体的研究。
目的：(1)制作国际上广泛承认并使用的CCI模型，用以研究痛必定对于慢性疼痛的镇痛作用。(2)证实痛必定具有良好的镇痛作用，且研究其是否作用在阿片类受体上，是否为非阿片类的镇痛中药。研究方法：(1)运用“Bennett-Xie”的方法，制作CCI模型，通过对大鼠压痛、冷敏和热痛指数的测定，来判断CCI模型是否成功。(2)运用阿片类受体拮抗剂纳洛酮作为工具药，注射痛必定前5min注射盐酸纳洛酮，观察痛必定的镇痛效果是否被纳洛酮所阻断。结果：(1)CCI术后大鼠的压痛、冷痛、热痛阈值均明显降低，且14d后仍维持在较低水平，无自行恢复的现象。(2)痛必定的镇痛作用没有被纳洛酮阻断。结论：(1)CCI模型具有慢性疼痛的特点，可以用于镇痛药物的研究，且有造模成功率高，动物成活率高的特点。(2)痛必定具有良好的镇痛效果，且其并不作用在阿片类受体上，是非阿片类的镇痛中药。
实验二，痛必定注射液对NO及NMDA受体的影响。
目的：(1)研究痛必定对CCI大鼠外周血中NO含量的影响。(2)从脊髓水平研究痛必定对CCI大鼠脊髓NR2B和SP含量的影响。 (3)从外周神经水平研究痛必定对CCI大鼠背根神经节NR2B和SP含量的影响。(4)从脊髓和脊髓上水平研究痛必定对CCI模型大鼠脑干、脊髓NRlmRNA、NR2B mRNA表达的影响。方法： (1)运用硝酸还原酶法，测量大鼠外周血清中NO的含量，研究痛必定对CCI大鼠NO含量的影响。 (2)运用免疫组化技术，研究痛必定在脊髓水平对NR2B和SP的影响。(3)运用免疫组化技术，研究在外周神经水平痛必定对脊髓DRG内NR2B和SP的影响。 (4)运用分子生物学手段，研究脊髓和脊髓上水平痛必定对NMDA受体mRNA的影响。结果：(1)痛必定能显著降低CCI大鼠外周血中NO的含量。(2)痛必定能显著降低CCI大鼠脊髓NR2B和SP的含量。(3)痛必定能显著降低CCI大鼠脊髓DRG内NR2B和SP的含量。(4)痛必定能显著抑制CCI模型大鼠脑干、脊髓NRl mRNA、NR2B tuRNA的表达。结论：(1)痛必定能抑制CCI大鼠NO的生成或释放。(2)痛必定能减少CCI大鼠脊髓及DRG中SP的生成或释放。(3)痛必定能抑制CCI大鼠脊髓及DRG内NR2B的表达。(4)痛必定能抑制CCI大鼠脊髓及脑干内NMDA受体的表达。
实验三，痛必定对正常大鼠背根神经节细胞钙离子通道的影响。
目的：(1)研究痛必定对于正常大鼠DRG神经元内钙离子电流的影响。(2)研究痛必定对正常大鼠DRG细胞钙通道抑制作用的亚型选择性。方法： (1)运用膜片钳方法研究痛必定对于急性分离的正常大鼠DRG神经元内钙离子电流的影响。(2)在膜片钳下，运用配对给药的方法，研究痛必定对于钙电流抑制作用亚型的选择。结果：(1)应用痛必定后，急性分离的正常大鼠DRG细胞内钙离子电流的峰值明显降低。 (2)痛必定与N型钙离子通道阻滞剂对于DRG细胞内的钙离子电流有相似的抑制作用，与L型钙离子通道阻滞剂对于DRG细胞内的钙离子电流的抑制作用有明显差异。结论：(1)痛必定能抑制急性分离的正常大鼠DRG细胞内的钙离子电流。(2)痛必定对于急性分离的正常大鼠DRG细胞内N型钙离子通道有选择性的阻滞作用。