Oddi括约肌平滑肌细胞原代培养及鉴定

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目的:建立一种方法简单、快速适用、重复性好的Oddi括约肌平滑肌细胞的体外培养模型。  方法:麻醉豚鼠,取豚鼠Oddi括约肌(the sphincter of oddi,SO)并用苏木素伊红(He matoxylin Eosin,HE)染色法的实验步骤对组织进行HE染色,显微镜下观察SO的镜下结构。无菌条件下解剖显微镜下分离豚鼠SO并纵形切开,刮去粘膜组织及表面结缔组织,将肌条切成1mm3~2mm3大小的组织块,用0.1%的II型胶原蛋白酶溶液消化大约4h,每30min观察一次,见组织块变小,边缘模糊,原来澄清液变为混悬液,获得大量梭形Oddi括约肌细胞后终止消化,收集消化液,经500um滤网过滤后,离心,弃上清液,加入适量含20%胎牛血清的DMEM培养基,吹打均匀后,移入25ml培养瓶,置于二氧化碳培养箱内静置培养。显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法进行a-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体鉴定,测原代细胞生长曲线。  结果:HE染色结果为细胞核和胞质内的嗜碱性物质被苏木素染成紫蓝色,细胞质和嗜酸性物质被伊红染成深浅不同的粉红色,细胞呈梭形,包浆丰富,细胞核呈椭圆形。倒置显微镜下观察原代Oddi括约肌平滑肌细胞(Sphincter of oddi Smooth Muscle Cells,SOSMCs)呈梭形或带状,细胞核呈卵圆形,位于中央。当细胞相互融合,约长满培养瓶80%时,可传代,呈典型的“峰-谷”样生长,依据细胞活性,细胞可传至第6代。经形态学观察、免疫细胞化学法鉴定均表明培养的细胞为SOSMCs。细胞增值曲线示豚鼠SOSMCs在第3天达到对数生长期,生长最为迅速,3天后细胞生长逐渐减缓,细胞增值活性逐渐降低。  结论:应用胶原蛋白酶消化法成功建立了豚鼠SOSMCs体外培养模型,此培养方法可作为研究SOSMCs生物学行为的有效模型。
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