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目的:研究北京友谊医院临床分离的阴沟肠杆菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的发生率、ESBLs表型与基因型,并同时检测AmpC酶,以了解阴沟肠杆菌的耐药特点与ESBLs菌株基因型的流行状况,从而为临床合理用药提供依据。
方法:调查2002年1月-2006年10月北京友谊医院分离的791株阴沟肠杆菌的耐药性;菌株的鉴定使用Vitek-AMS微生物鉴定仪;采用三维试验检测86株住院患者中阴沟肠杆菌的ESBLs与AmpC酶表型;β-内酰胺酶耐药基因型、整合子和质粒介导的喹诺酮类(qnr)耐药基因检测采用PCR扩增技术。耐药基因水平传播采用质粒接合试验。耐药性检测采用纸片扩散法与微量稀释法,根据CLSI/NCCLs的指南操作与判读结果。
结果:5年间,阴沟肠杆菌对临床常用抗菌药物呈现高耐药率。对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、头孢唑啉等抗菌药物的耐药率均高于80﹪。对三代头孢类药物头孢噻肟、头孢他啶的耐药率也达到40﹪左右。对阿米卡星、头孢吡肟、环丙沙星的敏感率分别为75.6﹪,78.0﹪,62.5﹪。
86株阴沟肠杆菌中ESBLs携带率高达48.8﹪;CTX-M型为主要类型。其中CTX-M-3亚型24株,占27.9﹪;CTX-M-9亚型14株(16.3﹪),CTX-M-14亚型3株(3.4﹪)。SHV-12型16株,占18.6﹪。TEM-1型26株,占30.2﹪。11株同时产ESBLs与AmpC酶,占12.8﹪,31株单独产ESBLs(36.0﹪),8株单独产高产AmpC酶(9.3﹪)。亚胺培南对ESBLs菌株的敏感率为100﹪。 ESBLs阳性菌株中有8株接合试验成功,ESBLs耐药基因成功转入受体菌。77.9﹪的阴沟肠杆菌携带不同大小的整合子,从1500bp整合子中检出的耐药基因盒包括:aadB、aadA2;2500bp整合子中检出PSE-1、aac6一Ⅱ、aadA4基因盒。
其中PSE-1为β-内酰胺类耐药基因。质粒介导的喹诺酮耐药基因-qnr在阴沟肠杆菌中检出率23.6﹪。 ESBLs阳性菌株中有38.2﹪阳性,ESBL阴性菌株未检出qnr。2株qnr阳性菌株接合试验成功。
结论:在阴沟肠杆菌中ESBLs与AmpC β-内酰胺酶是造成三代头孢耐药的主要因素。但四代头孢类药物,碳氢霉烯类抗生素,喹诺酮类抗生素,仍然对阴沟肠杆菌保持较高抑菌活性。CTX-M型与SHV型是阴沟肠杆菌ESBLs的主要基因型。ESBLs可以通过质粒接合试验进行水平传播。整合子在阴沟肠杆菌中广泛存在,通常含有多种耐药基因盒;Qnr基因常与ESBLs共同存在。