微囊化卵巢细胞移植对去卵巢小鼠骨质疏松防治作用的研究

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老年性骨质疏松与性腺功能衰退,性激素分泌不足有密切相关性的学说已被许多研究者们证实。本文的实验目的是纠正因性腺功能衰退而造成的机体各器官的退行性改变。实验设计是,将微囊化异体卵巢细胞移植入去卵巢小鼠腹腔,观察异体移植卵巢细胞的生长情况和功能状态及对去卵巢小鼠骨质疏松的防治作用。   健康雌性昆明小鼠,6周龄10只,分离培养卵巢细胞并将卵巢细胞微囊化。放射免疫分析法测定微囊化的卵巢细胞培养液中雌二醇及孕酮的含量。2月龄32只,每组8只,随机分为4组:正常组、假手术组、去卵巢组、移植组。假手术组经背部切除卵巢周围少量脂肪;去卵巢组行双侧卵巢切除术;移植组行双侧卵巢切除术后立即将微囊化的卵巢细胞移植入腹腔。   术后(去卵巢组、微囊化的卵巢细胞移植组和假手术组)90d时处死所有动物,取小鼠右侧胫骨经HE染色进行组织学观察,免疫组织化学检测ALP和MMP-9的表达。应用图像分析仪行胫骨上段形态计量及分析免疫组织化学染色结果。取小鼠左侧股骨和第五腰椎体,用万能电子实验机进行生物力学测试。将左侧股骨用碱水解法水解,酶标仪测水解液羟脯氨酸、钙、磷含量。   放射免疫分析法测定显示,微囊化的卵巢细胞雌二醇及孕酮的分泌量与同期体外培养的卵巢细胞相比没有差异(P>0.05)。HE切片胫骨上段形态计量结果,各项检测指标假手术组和正常组之间无差异(P>0.05)。骨小梁体积、平均骨小梁厚度:去卵巢组显著低于正常组(P<0,001);移植组与正常组之间无差异(P>0.05)。平均骨小梁间距:去卵巢组显著高于正常组(P<0.001);移植组与正常组之间无差异(P>0.05)。结点末端比:去卵巢组显著低于正常组(P<0,001);移植组低于正常组(P<0.05)。免疫组织化学检测结果,ALP表达:移植组与假手术组和正常组之间无差异(P>0.05),去卵巢组低于正常组(P<0.05);骨基质中MMP-9的表达移植组与假手术组和正常组之间无差异(P>0.05),去卵巢组高于正常组(P<0.05);MMP-9阳性的软骨细胞、OB与OC个数的比值,去卵巢组显著低于正常组(P<0.001),移植组与正常组和假手术组之间无明显差异(P>0.05)。小鼠股骨矿物质和有机质含量测定结果显示,正常组和假手术组之间无差异(P>0.05)。羟脯氨酸:去卵巢组低于正常组(P<0.05);移植组与正常组之间无差异(P>0.05)。钙含量:去卵巢组低于正常组(P<0.05),移植组与正常组之间无差异(P>0.05)。磷含量:去卵巢组低于正常组(P<0.05),移植组与正常组相比无差异(P>0.05)。小鼠股骨三点弯曲试验的生物力学参数显示各组间、组内均数无差异(P>0.05)。小鼠腰椎压缩实验的生物力学参数显示,假手术组和正常组之间无差异(P>0.05)。破坏载荷:去卵巢组显著低于正常组(P<0.001),移植组低于正常组(P<0.05)。弹性模量:去卵巢组低于正常组(P<0.05);移植组与正常组之间无差异(P>0.05)。能量吸收:去卵巢组显著低于正常组(P<0.01),移植组与正常组之间无差异(P>0.05)。   研究结果显示:微囊化的异体卵巢细胞在去卵巢小鼠腹腔内能够生存,并且具有内分泌功能;对去卵巢小鼠骨质疏松的防治起积极的作用。
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