【摘 要】
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前言 作为腹膜主要细胞群的间皮细胞长期持续暴露于高糖透析液中,受到了一系列损害,并最终使腹透患者因超滤失败,而放弃腹膜透析。醛糖还原酶(AR)激活已被证实是多种糖尿病并
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前言 作为腹膜主要细胞群的间皮细胞长期持续暴露于高糖透析液中,受到了一系列损害,并最终使腹透患者因超滤失败,而放弃腹膜透析。醛糖还原酶(AR)激活已被证实是多种糖尿病并发症的重要发病机制之一。腹膜形态学的研究已证实腹膜血管的改变与糖尿病微血管病变相似,而且腹膜透析所用的葡萄糖浓度远高于糖尿病患者的血糖水平,所以推测多元醇通路(PP)可能在高糖引发腹膜间皮细胞(PMC)损伤中也起一定作用。腹膜炎及腹膜透析可刺激腹腔巨噬细胞产生大量一氧化氮(NO),NO可调控AR活性。本实验将利用体外培养的PMC观察高糖及其伴随的高渗,以及NO对腹膜间皮细胞AR活性及基因表达的影响,并研究氨基胍(AG)对腹膜间皮细胞AR活性的抑制作用。从多元醇通路的角度探讨高糖造成PMC损伤的机制,为今后应用醛糖还原酶抑制剂(ARI)减轻高糖透析液对PMC造成的损伤提供体外实验依据。 实验材料 主要试剂和仪器:M199细胞培养液购于沈阳博尔美公司,NADPH为Roche公司产品,Trizol、醛糖还原酶引物购于沈阳联星有限公司,反转录试剂盒为TAKARA产品。紫外分光光度仪(BECMAN DU640);PCR扩增仪(Biometra Tp)。 实验方法 1.腹膜间皮细胞的分离、培养及鉴定 采用人的网膜作为细胞来源,用胰酶消化的方法获得PMC。采用间接
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