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目的：本实验以RAW264.7巨噬细胞为研究对象，通过专门设计的NHE1-shRNA慢病毒，研究慢病毒特异性沉默NHE1基因对细胞内胆固醇含量的影响。 方法:商业定制NHE1-shRNA慢病毒载体及附带阴性对照乱码病毒载体（CON077），利用基因测序及基因库（GenBank）Blast序列比对，检测序列吻合情况。用包装好的慢病毒转染 RAW264.7细胞，通过病毒稀释的感染复数（MOI）100、50、25、10、5、1转染寻找最适值。实验共设为三个组分别为：慢病毒特定干扰组、慢病毒感染病毒阴性对照组及未感染空白对照组，通过免疫荧光检测病毒感染成功率。实时荧光定量PCR（qPCR）及免疫印迹实验（Western Blot）分别检测 NHE1在 mRNA及蛋白水平的表达。转染后在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）培养基(50mg/L)中共孵育24小时。利用酶法结合高效液相色谱法（HPLC）测定细胞内游离胆固醇（FC）及总胆固醇(TC)的含量，计算得出胆固醇酯（CE）及胆固醇酯与总胆固醇的比值（CE/TC）。 结果：合成的慢病毒基因测序结果与GenBank中所需序列相吻合。病毒感染复数（MOI）50时转染效率达最高。实时荧光定量PCR结果显示NHE1-shRNA慢病毒干扰组，NHE1 mRNA表达较阴性对照组明显降低（0.237±0.061）（P＜0.05），而阴性对照组（1.145±0.475）与空白对照组（0.977±0.118）相对比表达无统计学差异（P＞0.05）；免疫印迹实验（Westen blot）结果显示NHE1-shRNA慢病毒干扰组，NHE1蛋白表达较阴性对照组降低（4.697±1.233）（P＜0.05），而阴性对照组（31.196±2.419）与空白对照组（35.512±3.158）相对比表达无统计学差异。通过氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）干预后，检测细胞内各胆固醇指标显示，慢病毒干扰组与阴性对照组在除游离胆固醇（FC）外，各指标（TC、CE、CE/TC）均有明显减少，且具有统计学意义（P＜0.05）；阴性对照组与空白对照组之间比较，各指标（TC、FC、CE、CE/TC）无明显差异，无统计学意义（P＞0.05）。 结论：NHE1-shRNA能顺利转染细胞，并能成功抑制细胞内 NHE1基因及蛋白表达，而乱码病毒转染细胞则无相应基因及蛋白表达的影响；酶法结合高效液相色谱法结果显示，有效抑制NHE1可以明显降低细胞内TC及CE含量，CE/TC值降低。提示NHE1可能参与Ox-LDL干预下巨噬细胞内脂代谢的调节。