应激对家禽大麻素受体信号的影响研究

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为探讨CB1受体信号通路在应激调控食欲过程中起到的作用,本课题进行了以下研究。本研究通过测定不同日龄家禽各组织中CB1受体的表达量,研究CB1受体的时空分布。选择体重相近的7,21和35日龄的肉仔鸡和7日龄蛋公雏各8只,采集下丘脑,肝脏,十二指肠,空肠,回肠。试验结果显示,在7,21和35日龄的肉仔鸡和7日龄蛋公雏中,CB1受体在下丘脑中的表达量均远高于其他外周组织,且下丘脑中CB1受体的表达量随日龄的增加而显著增加,在7日龄时,肉仔鸡和蛋公雏各组织中CB1受体的表达量并不存在差异。本研究通过热应激和糖皮质激素DEX处理,研究应激时CB1受体及相关基因表达的变化情况。热应激试验:选择体重相近的28日龄雄性AA肉仔鸡144只,分为四组(10h热应激组,10h对照组,72h热应激组,72h对照组),每组6个重复,每个重复6只鸡。DEX试验:选择体重相近的28日龄雄性AA肉仔鸡144只,分为四组(24h DEX组、24h对照组,72h DEX组,72h对照组),每组6个重复,每个重复6只鸡。试验结果显示,应激(热应激和DEX处理)可导致采食量和体增重的显著降低,肛温的显著升高。热应激时,肉仔鸡下丘脑中GR mRNA表达量显著增加,AMPK?1mRNA表达量显著降低,AMPK磷酸化水平降低。DEX处理时,肉仔鸡下丘脑中GR、AMPK??、LKB1、CB1受体mRNA的表达量显著升高,AMPK磷酸化水平升高。说明,糖皮质激素可以激活CB1受体和AMPK信号通路,从而调控了食欲,能量代谢和平衡。本研究通过脑室注射CB1受体激活剂ACEA和拮抗剂SR141716,研究CB1受体对AMPK信号通路的影响。两个试验均选择体重165g左右的7日龄肉仔鸡40只进行脑室埋管,恢复至10日龄进行脑室注射,脑室注射SR141716分为DMSO组,0.1,1,2ugSR141716组,脑室注射ACEA分为DMSO组,0.5,1,2ug ACEA组,每半小时统计采食量。根据结果分别选择1ug SR141716和2ug ACEA为最佳注射剂量,1h和3h为最佳采样时间,进行重复试验。试验结果显示,脑室注射SR141716使肉仔鸡采食量下降,下丘脑中CB1受体、AMPK?2、CART mRNA表达量显著升高,AgRP、POMC mRNA表达量显著降低。说明,抑制CB1受体可通过降低促食欲基因AgRP的表达,升高抑食欲基因CART的表达,抑制家禽食欲。脑室注射ACEA可增加肉仔鸡的采食量,降低了其下丘脑中CB1受体、POMC mRNA的表达水平,升高了AgRP的mRNA表达水平。说明,激活CB1受体可通过增加促食欲基因AgRP的表达,促进家禽食欲。本研究表明,家禽CB1受体在下丘脑中高度表达,并广泛分布在肝脏、肠道等外周组织。糖皮质激素可通过激活CB1受体信号通路和AMPK信号通路,调控家禽食欲。CB1受体可通过调控AMPK及其下游的食欲调控因子,调控家禽食欲。
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