论文部分内容阅读
动脉粥样硬化是目前威胁人类健康最严重的疾病之一。而血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的异常增殖是动脉粥样硬化产生和发展的关键病理过程之一，也是许多血管增殖疾病如高血压、冠心病等的共同病理学基础。血脂异常，脂质沉积和过氧化产物等因素均可引起VSMC增生和迁移，因此，抑制VSMC异常增殖是治疗血管增生性疾病的主要途径。丹参与川芎均是我国传统中药，具有活血化瘀、疏通血脉、祛瘀通滞、通经止痛、凉血消肿、除烦清心等功能，已广泛用于心脑血管疾病的治疗。丹芎方(Danxiongfang formula，DF)是本实验室研制的以丹参主要脂溶性成分隐丹参酮(cryptotanshinone，CT)和主要水溶性成分丹参素(danshensu，DSS)以及川芎的活性主成分阿魏酸(ferulic acid，FA)，按照不同比例形成的6个不同的复方制剂。动物药效学试验结果表明，丹芎方具有良好的降血脂、保肝、抗炎和抗氧化作用。药动学实验证明，复方给药后其主要组分的体内过程呈现出一定的药动学优化。本文主要研究了丹芎方及其活性主成分对大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响，对过氧化氢损伤的大鼠胸主动脉平滑肌细胞的保护作用以及对体外羟自由基的作用，结果为丹芎方调节血脂，预防治疗动脉粥样硬化提供了进一步的实验支持。
1.丹芎方及其活性主成分对大鼠胸主动脉平滑肌细胞细胞活力的影响大鼠VSMC的细胞活力采用MTT法进行测定。结果表明，与正常对照组相比，丹芎方及其活性主成分均可明显抑制大鼠VSMC的细胞活力，其中以丹芎方4的作用程度最强，且活性主成分间具有协同作用。
2.丹芎方及其活性主成分对大鼠胸主动脉平滑肌细胞细胞数的影响大鼠VSMC的细胞数量采用细胞计数法进行测定。结果表明，与正常对照组相比，丹芎方及其活性主成分均可减少大鼠VSMC的细胞数量，其中以丹芎方1的作用最强，且活性主成分间具有协同作用。
3.丹芎方及其活性主成分对大鼠胸主动脉平滑肌细胞蛋白含量的影响大鼠VSMC的蛋白含量采用Bradford法进行测定。结果表明，丹芎方及其活性主成分均可在一定程度上减少大鼠VSMC细胞的总蛋白含量，但结果无统计学显著差异。
4.丹芎方及其活性主成分对大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养液中一氧化氮(Nitric oxide，NO)和内皮素—1(Endothelin—1，ET—1)含量的影响大鼠VSMC的NO含量和ET—1含量分别采用硝酸还原酶法和ELISA法进行测定。结果表明，与正常对照组相比，丹芎方及其活性主成分均可提高大鼠VSMC的NO含量，其中以丹芎方4的作用程度最强，且活性主成分间具有一定的协同作用。丹芎方及其活性主成分虽能减少VSMC培养液中ET—1的含量，但结果无统计学显著差异。
5.丹芎方及其活性主成分对过氧化氢所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞损伤的保护作用过氧化氢所致大鼠VSMC损伤的细胞活力采用MTT法进行测定。结果表明，与模型组相比，丹芎方及其活性主成分能够明显提高过氧化氢损伤VSMC的细胞活力，其中以丹芎方5的作用程度最强，且活性主成分间具有协同作用。
6.丹芎方及其活性主成分对过氧化氢所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞损伤的超氧化物歧化酶(superoxide dismutases，SOD)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)水平的影响过氧化氢所致大鼠VSMC损伤后的SOD活性和MDA含量分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法进行测定。结果表明，与模型组相比，丹芎方及其活性主成分能够明显提高过氧化氢损伤VSMC的SOD活性，同时还可减少MDA的含量，其中以丹芎方5和3的作用程度最强，且活性主成分间具有协同作用。
7.丹芎方及其活性主成分对羟自由基（·OH)的清除作用利用电子自旋共振(ESR)与自旋捕集技术，测定了FA、DSS、CT和DF对Fenten反应模型产生的·OH的清除作用。结果表明，丹芎方及其活性主成分均可有效地清除Fenten反应所产生的羟自由基，其中以丹芎方中3号方的作用最强，但活性主成分之间没有显示出协同作用。