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目的本实验主要在细胞水平探讨亲环蛋白A是否通过调控自噬水平促进氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导RAW264.7单核巨噬细胞的活化与凋亡。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,应用蛋白质印迹法(Western blot)检测亲环蛋白A、β-actin、LC3、beclin-1、bcl-2、ABCA1及CD36的蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清中亲环蛋白A的蛋白含量;应用小干扰RNA沉默亲环蛋白A的表达,并应用western blot检测沉默效果;应用电镜观察细胞内自噬体的形成;应用GFP-RFP-LC3病毒感染细胞观察自噬流强弱;应用油红染色观察细胞内脂质沉积;应用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞表面CD80、CD86及MHCII的阳性率;应用Tunel法检测细胞凋亡率。结果(1)ox-LDL(100mg/L)刺激24h后RAW264.7细胞亲环蛋白A蛋白水平显著升高,在6h达到高峰(p<0.05);细胞培养上清中亲环蛋白A蛋白水平在24h内随时间梯度上升(p<0.05)。(2)应用转染小干扰RNA沉默亲环蛋白A表达后,再予ox-LDL刺激0,6,12及24h后,亲环蛋白A沉默组中自噬相关蛋白LC3II/I水平较阴性对照组显著降低(p<0.05);Beclin-1水平没有在两组间没有显著差异;电镜观察,亲环蛋白A沉默组细胞内自噬体显著降低于阴性对照组(p<0.05)。(3)预先感染GFP-RFP-LC3腺病毒后,再用ox-LDL干预24h,亲环蛋白A沉默组的细胞中GFP—RFP+光斑数(自噬溶酶体)较阴性对照组显著升高(p<0.05)。(4)ox-LDL干预24h后,亲环蛋白A沉默组的ABCA1蛋白水平显著升高,CD36蛋白水平显著降低,与阴性对照组相比(p<0.05);亲环蛋白A沉默组细胞内脂质沉积较阴性对照组显著降低(p<0.05)。(5)ox-LDL干预24h后,Cy PA沉默组细胞CD80、CD86及MHCII阳性率较阴性对照组显著降低(p<0.05),而当提前使用自噬抑制剂3-MA预刺激1h后再予ox-LDL干预后,两组间CD86及MHCII的无显著差异(p>0.05)。(6)Ox-LDL干预24h后,亲环蛋白A沉默组细胞凋亡率较阴性对照组显著降低(p<0.05),而当提前使用自噬抑制剂3-MA预刺激1h后再予ox-LDL干预后,两组间细胞凋亡率无显著差异(p>0.05)。结论(1)ox-LDL可以刺激RAW264.7细胞亲环蛋白A表达升高并分泌到细外。(2)亲环蛋白A促进ox-LDL诱导RAW264.7细胞的自噬,抑制自噬流。(3)亲环蛋白A促进ox-LDL干预后RAW264.7细胞内脂质沉积。(4)亲环蛋白A通过调控自噬促进ox-LDL诱导RAW264.7细胞的活化及凋亡。