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胃癌(Gastric Cancer,GC)是最常见的胃部肿瘤,来源于上皮的恶性肿瘤。是我国最常见的恶性肿瘤之一。胃癌的基因研究是诊断、治疗及防治胃癌发生和转移的基本途径之一。胃癌和其他人类恶性肿瘤一样,都是多基因病变,其发生和发展不仅与刺激细胞异常增殖的肿瘤基因(Ocogene)变异及高表达有关,也直接和细胞中的抑制细胞突变和异常增殖的抑癌基因(Tumor SuppressorGene,TSG)功能失活相随。
2000年Dammann等用酵母双杂交筛选方法在3号染色体短臂(3p21.3)克隆出一个抑癌基因,由于其核苷酸序列的碳端(C-terminus)与小鼠RAS相关区域家族1(RAS association domain family1)及小鼠RAS效应蛋白Norel高度同源,遂命名为RAS相关区域家族1,即RASSF1基因。RASSF1基因至少存在7个不同的剪接体(剪接体A-G)。但其中的三个主要的剪接体,即RASSF1A、RASSF1B和RAS5F1C,由6个外显子顺序拼接而成。这三个剪接体均共用3-6外显子,编码Ras相关区域。
研究目的:1.主要通过观察RASSF1基因三个剪接体(-A,-B,-C)在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达水平,初步探讨其在胃癌发生发展中的作用；2.进一步研究RASSF1B基因在肿瘤细胞中的表达及其克隆与序列分析,为深入研究RASSF1B基因的生物学功能及作用机制奠定基础。
研究方法:1.利用半定量RT-PCR检测RASSF1基因的三种剪接体在胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901,以及胃癌组织和癌旁组织中的表达水平；2.利用半定量RT-PCR检测RASSF1B基因在胃腺癌(AGS)、高转移肺癌(95D)、肺腺癌(LTEP-a-2)、肝癌(HEPG21和白血病细胞(U937)中的表达水平,并从AGS中克隆RASSF1B基因,运用生物信息学方法对其进行序列分析。
研究结果:1.RASSF1基因三个剪接体(-A,-B,-C)在BGC-823细胞中相对表达量分别为0.27、0.96、0.79,在SGC-7901细胞中相对表达量分别为0.62、0.85、0.98。2.在60例胃癌组织中RASSF1A,RASSF1B表达缺失率分别为60.2％(37／60),25％(15／60),RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7％(55／60)。3.RASSF1B基因在肺腺癌细胞株LTEP-a-2和白血病细胞株U937中表达量较高,序列分析显示该基因含有一个Ras结合区域。
研究结论:1.RASSF1基因三种剪接体在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,且RASSF1A基因在低分化的BGC-823细胞中的表达量明显低于中分化的SGC-7901细胞；25臣过对60例胃癌患者及癌旁正常组织中3种不同剪接体的表达研究发现,RASSF1基因三种剪接体在胃癌组织中表达均下调,RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达差异无显著性,RASSF1C无论在癌抑或癌旁正常组织中均全部表达,因此RASSF1C不是胃癌的抑癌基因,而与其来自同一DNA因不同剪接所产生的RASSF1A,在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达则有显著性差异,癌旁正常组织几乎全部表达,而相匹配的癌组织中却存在较高的RASSF1A mRNA的表达缺失。进一步支持了RASSF1A基因作为胃癌候选抑癌基因的论断。3.发现在不同的癌变细胞系中,RASSF1B基因虽都有表达,但表达量存在明显的差异,在提示RASSF1B基因可能与肿瘤的类型有关,并在不同种类的癌变细胞中所起的作用可能不同,RASSF1B的表达还可能与细胞的分化程度有关。