论文部分内容阅读
一、目的： 胃癌是全球死亡率极高的恶性肿瘤之一，而我国正是胃癌高发地区。由于作用因素复杂，胃癌的发病机制仍不十分明了。目前已有研究表明碳酸酐酶家族(carbonic anhydrases，CAs)在人类肿瘤的发生发展中扮演着非常重要的角色，其中碳酸酐酶IV(carbonic anhydrase IV，CA4)在肠癌中就是通过靶向WTAP–WT1–TBL1抑制Wnt通路而发挥抑癌效应。鉴于此，本论文以胃癌作为研究对象，收集临床样本并采用多种生物学实验技术，希望阐明CA4在胃癌发生中所发挥的生物学功能，为胃癌的发病机制提供新的理论依据。 二、方法： 1.采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（real-time reverse transcription-PCR，qRT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（Western blot，WB）检测CA4是否在胃癌及癌旁组织和胃正常细胞株GES-1及癌细胞株AGS中是否存在差异性表达。 2.采用焦磷酸测序技术检测GES-1和AGS中CA4基因甲基化状态。 3.构建CA4过表达质粒，转染至GES-1和AGS细胞中，然后分别采用流式细胞仪（flow cytometer）、实时细胞分析仪（Real-Time Cell Analyzer，RTCA）和细胞克隆形成实验检测细胞周期和增殖的变化。 4.上调 CA4在 GES-1和 AGS细胞中的表达后，应用 WB检测细胞周期相关蛋白CDK2表达水平。 三、结果： 1.相对于癌旁组织和胃正常粘膜细胞株 GES-1，胃癌癌组织标本和癌细胞株AGS均呈低表达。 2. AGS细胞CA4基因CpG岛甲基化率高于GES-1。 3.上调CA4在GES-1和AGS细胞中的表达即可抑制细胞增殖也可阻滞细胞周期。 4.过表达CA4可以抑制GES-1和AGS细胞中CDK2的表达。 四、结论： 本实验结果证实，与胃癌癌旁组织和正常胃粘膜细胞相比，胃癌癌组织和癌细胞中CA4均呈低表达，并且AGS细胞中CA4基因CpG岛甲基化率高于GES-1。通过CA4质粒脂质体转染，发现，过表达CA4可以抑制细胞增殖和阻滞细胞周期，并且细胞周期相关蛋白CDK2呈相应下调。总之，在胃癌发生过程中，CA4可能通过调控细胞CDK2的表达而阻滞细胞周期，同时，CA4具备作为胃癌肿瘤标志物的潜在价值。