论文部分内容阅读
近年来H9N2亚型禽流感在我国家禽中流行较广，它不仅给养禽业造成巨大的损失，还威胁到人类的健康。疫苗接种是防控禽流感的一种主要手段，由于禽流感病毒容易发生变异，不同地区流行毒株生物学特性的差异，加上我国地域广阔，养殖模式多样化和养殖水平参差不齐等因素的存在，免疫失败的情况时有发生。因此，本研究对实验室分离的8株H9N2亚型AIV进行生物学特性、HA基因序列和免疫原性的研究，期待培养、筛选出适合我国大部分地区使用的H9N2亚型AIV疫苗候选株。 本研究对8株H9N2亚型AIV(278株、329株、41株、387株、6株、379株、388株、QY株)的生物学特性(EID50、ICPI、IVPI和MDT)进行研究，结果显示，这8株病毒的：EID50在10-6.5～10-9.32/0.2 mL之间，ICPI值在0.03～1.16之间，MDT值在104 h～148.8 h之间，IVPI值都为0，表明这8株病毒均属于低致病性禽流感病毒。 利用RT-PCR技术成功扩增出8株病毒的HA基因，其ORF全长1683 bp或1742bp。序列分析表明这8株病毒与CK/HK/G9/97和DK/HK/Y280/97在同一分支上，均属于G9-like分支；8株病毒的HA基因核苷酸序列与各参考毒株之间的同源性在80.0％～99.8％之间，氨基酸序列与各参考毒株之间的同源性在83.8％～99.6％之间；8个毒株的裂解位点基序均为PARSSR↓GLF，符合低致病性禽流感病毒的分子特征；含有8个潜在糖基化位点，且都比较保守；8个毒株的受体结合位点除了198位变异较大，可能为V、A或T，其他的都比较保守。 交叉血凝试验结果显示，各毒株之间的交叉血凝效价在8～14 log2之间。用各毒株尿囊液制备油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡，三周之后278组、379组、387组、388组、41组、6组、329组和对照组的抗体平均滴度分别为10 log2、9.1 log2、10 log2、9.7 log2、9.8 log2、10 log2、9.6 log2和0 log2，各免疫组HI抗体滴度差异不明显；用H9N2亚型AIV(07株)鼻腔接种攻毒，攻毒后5 d各组的排毒情况分别为2/10、2/10、3/10、7/10、0/10、2/10、3/10和10/10，结果显示41组免疫鸡获得良好的保护力，表明41株具备作为H9N2亚型AIV疫苗候选株的潜力。 用筛选的H9N2亚型AIV疫苗候选株(41株)与H5亚型AIV疫苗候选株(D7株)制备H5+H9二联油乳剂灭活疫苗，对鸡群进行免疫，在免疫后7 d可检测到HI抗体，H5和H9的抗体平均滴度分别为0.74 log2和0.76 log2，H5和H9的抗体平均滴度分别在一免后35 d和28 d达到峰值，为7.2 log2和8.12 log2，这种较高抗体水平持续时间为3周，随后逐渐下降，到一免后119 d时抗体平均滴度分别为2.9 log2和2.4log2；在一免后21 d进行二免，H5和H9的抗体平均滴度分别在二免后的21 d和28 d达到峰值，为10.1 log2和10.3 log2，随后逐渐下降，至二免后的98 d，H5和H9的抗体平均滴度分别为7.5 log2和7.3 log2。 用所制备的H5+H9二联灭活疫苗免疫14 d龄SPF鸡，21 d后H5和H9的HI抗体平均滴度分别为7.16 log2和7.9 log2，对H5和H9亚型AIV的保护率分别为100％(不死亡)和70％。用二联灭活疫苗对SPF鸡进行二免后，可产生高水平的HI抗体，二免后28 d H5和H9抗体平均滴度分别为10 log2和10.3 log2，对H5和H9亚型AIV的保护力分别为100％和80％：二免后98d H5和H9抗体平均滴度分别为7.8 log2和7.3 log2，对H5和H9亚型AIV的保护力也分别为100％和80％。