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第一部分过表达miR-146a胞外囊泡对UC大鼠治疗机制的研究
目的：研究过表达miR-146a的BMSC-EVs通过TRAF6/NF-κB信号通路改善UC的作用机制
方法：应用TNBS/乙醇灌肠建立大鼠急性UC模型。将过表达miR-146a的慢病毒转染BMSCs，细胞饥饿后收集上清，通过梯度离心法提取骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡(bone marrow mesenchymal stem cells-extracellular vesicles，BMSC-EVs)。通过透射电镜及westernblot对BMSC-EVs的形态及蛋白标记物分别进行鉴定。尾静脉注射过表达miR-146a的BMSC-EVs干预模型大鼠，评估大鼠的一般情况(包括体重、结肠长度、DAI评分等)。应用ELISA、westernblot及qRT-PCR检测TRAF6/NF-κB信号通路及下游相关细胞因子的蛋白及mRNA表达水平。
结果：1、成功构建过表达miR-146a的慢病毒，将基因改造的慢病毒成功转染进BMSCs并提取得到过表达miR-146a的BMSC-EVs。2、过表达miR-146a的BMSC-EVs能下调模型大鼠肠道中TRAF6和IRAK1的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)。3、过表达miR-146a的BMSC-EVs能抑制TRAF6下游的NF-κBp65亚基和IκBα的磷酸化水平，同时下调TNF-α、IL-6和IL-1β炎症细胞因子的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论：过表达miR-146a的BMSC-EVs可能通过调控TRAF6抑制下游的NF-κB信号通路改善UC。
第二部分复方苦参汤通过Notch通路调节UC肠黏膜屏障功能的机制研究
目的：研究复方苦参汤对DSS诱导UC的治疗效果及其作用机制
方法：利用DSS建立小鼠急性UC模型，各组分别予低、中、高剂量(3.64 g/kg，7.28 g/kg，14.56 g/kg)复方苦参汤和美沙拉秦缓释颗粒(0.52 g/kg)干预模型小鼠，记录小鼠体重、大便性状、便血情况及结肠长度，评估疾病活动指数及HE病理切片组织学评分。并进一步采用透射电镜和免疫荧光染色技术检测紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达情况；westernblot检测MMP-9蛋白表达变化；IHC和westernblot分别检测结肠上皮细胞增殖指标Ki67和凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3；westernblot检测肠道通透性相关指标MUC2及信号通路ATOH1、Hes1和Notch1；多功能酶标仪检测小鼠血浆中FITC-Dextran4000的荧光强度；流式细胞仪检测小鼠脾脏和肠系膜淋巴结中M1和M2的百分比；qRT-PCR检测结肠组织中iNOS、Arg1、TNF-α和IL-10等指标。
结果：1、复方苦参汤能明显改善模型小鼠体重和结肠长度，降低DAI和组织学评分，减轻肠道炎症损伤。2、复方苦参汤抑制MMP-9表达，促进紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达。3、复方苦参汤能上调增殖指标Ki67的表达，抑制促凋亡蛋白cleavedcaspase-3的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)。4、复方苦参汤能通过抑制Notch信号通路活化，进一步抑制Hes1表达，促进ATOH1表达，从而促进肠上皮细胞向分泌细胞系(如杯状细胞)分化，并分泌大量粘蛋白(MUC2)，降低肠道通透性。5、复方苦参汤能降低M1/M2比例，促进巨噬细胞向M2极化，促进肠上皮组织损伤修复。
结论：复方苦参汤可通过调节Notch通路、抗炎、抗凋亡促增殖、降低肠道通透性及促进上皮组织修复四个方面改善肠黏膜屏障功能，缓解DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎。
目的：研究过表达miR-146a的BMSC-EVs通过TRAF6/NF-κB信号通路改善UC的作用机制
方法：应用TNBS/乙醇灌肠建立大鼠急性UC模型。将过表达miR-146a的慢病毒转染BMSCs，细胞饥饿后收集上清，通过梯度离心法提取骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡(bone marrow mesenchymal stem cells-extracellular vesicles，BMSC-EVs)。通过透射电镜及westernblot对BMSC-EVs的形态及蛋白标记物分别进行鉴定。尾静脉注射过表达miR-146a的BMSC-EVs干预模型大鼠，评估大鼠的一般情况(包括体重、结肠长度、DAI评分等)。应用ELISA、westernblot及qRT-PCR检测TRAF6/NF-κB信号通路及下游相关细胞因子的蛋白及mRNA表达水平。
结果：1、成功构建过表达miR-146a的慢病毒，将基因改造的慢病毒成功转染进BMSCs并提取得到过表达miR-146a的BMSC-EVs。2、过表达miR-146a的BMSC-EVs能下调模型大鼠肠道中TRAF6和IRAK1的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)。3、过表达miR-146a的BMSC-EVs能抑制TRAF6下游的NF-κBp65亚基和IκBα的磷酸化水平，同时下调TNF-α、IL-6和IL-1β炎症细胞因子的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论：过表达miR-146a的BMSC-EVs可能通过调控TRAF6抑制下游的NF-κB信号通路改善UC。
第二部分复方苦参汤通过Notch通路调节UC肠黏膜屏障功能的机制研究
目的：研究复方苦参汤对DSS诱导UC的治疗效果及其作用机制
方法：利用DSS建立小鼠急性UC模型，各组分别予低、中、高剂量(3.64 g/kg，7.28 g/kg，14.56 g/kg)复方苦参汤和美沙拉秦缓释颗粒(0.52 g/kg)干预模型小鼠，记录小鼠体重、大便性状、便血情况及结肠长度，评估疾病活动指数及HE病理切片组织学评分。并进一步采用透射电镜和免疫荧光染色技术检测紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达情况；westernblot检测MMP-9蛋白表达变化；IHC和westernblot分别检测结肠上皮细胞增殖指标Ki67和凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3；westernblot检测肠道通透性相关指标MUC2及信号通路ATOH1、Hes1和Notch1；多功能酶标仪检测小鼠血浆中FITC-Dextran4000的荧光强度；流式细胞仪检测小鼠脾脏和肠系膜淋巴结中M1和M2的百分比；qRT-PCR检测结肠组织中iNOS、Arg1、TNF-α和IL-10等指标。
结果：1、复方苦参汤能明显改善模型小鼠体重和结肠长度，降低DAI和组织学评分，减轻肠道炎症损伤。2、复方苦参汤抑制MMP-9表达，促进紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达。3、复方苦参汤能上调增殖指标Ki67的表达，抑制促凋亡蛋白cleavedcaspase-3的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)。4、复方苦参汤能通过抑制Notch信号通路活化，进一步抑制Hes1表达，促进ATOH1表达，从而促进肠上皮细胞向分泌细胞系(如杯状细胞)分化，并分泌大量粘蛋白(MUC2)，降低肠道通透性。5、复方苦参汤能降低M1/M2比例，促进巨噬细胞向M2极化，促进肠上皮组织损伤修复。
结论：复方苦参汤可通过调节Notch通路、抗炎、抗凋亡促增殖、降低肠道通透性及促进上皮组织修复四个方面改善肠黏膜屏障功能，缓解DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎。