论文部分内容阅读
第一部分Th1、Th2、CD4+CD25+Foxp3+及分泌IL-10调节性T细胞数量检测
目的:本部分旨在以健康志愿者作为对照组,检测过敏性鼻炎(AR)患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(nTreg细胞)、分泌IL-10调节性T细胞(Tr1)、Th1、Th2细胞数量。
方法:(1)通过流式细胞术检测过敏性鼻炎患者(43例)和健康者(38例)外周血中 CD4+CD25+Foxp3+T细胞IFN-γ+IL-4-CD4+,IL-4+IFN-γ-CD4+,IL-10+IL-4-CD4+T细胞(分别代表nTreg,Th1,Th2,Tr1细胞)；(2)对过敏性鼻炎患者总临床(包括鼻痒、清水涕、喷嚏、鼻堵、眼痒)进行症状评分,将临床症状严重程度与外周血中nTreg,Tr1细胞数量相关性分析；
结果:(1)过敏性鼻炎患者组与健康对照组比较,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在外周血单核细胞(PBMCs)、CD4+T细胞中的所占比例,Foxp3在CD4+CD25+Foxp3+T表达及IFN-γ+IL-4-CD4+细胞(Th1)在CD4+T细胞中所占比例无统计学意义(P>0.05)；过敏性鼻炎组IL-4+IFN-γ-CD4+细胞(Th2)在CD4+T细胞中所占比例显著增高(P<0.0001),与健康对照组比较具有显著统计学差异；而IL-10+IL-4-CD4+T细胞(Tr1)在CD4+T细胞中所占比例与健康对照组比较过敏性鼻炎组显著降低(P<0.001);(2)过敏性鼻炎患者外周血中nTreg细胞在CD4+T细胞中所占比例与总临床症状评分无明显相关性；而Tr1细胞在CD4+T细胞中所占比例与临床症状评分呈显著负相关(r=-0.45,P<0.01)；
结论:过敏性鼻炎患者外周血中Th2细胞在CD4+T细胞中所占比例明显升高,Tr1细胞明显降低,同时,Tr1细胞在CD4+T细胞中所占比例与总临床症状评分呈明显负相关。
第二部分CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞功能研究
目的:CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在机体免疫反应中发挥着重要的免疫抑制/调节作用,本部分旨在以健康对照组为对照,检测过敏性鼻炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞功能。
方法:选择过敏性鼻炎患者(6例)和健康对照组(6例),经静脉穿刺抽取肝素抗凝血50ml,通过免疫磁珠分选出CD4+CD25-T细胞、CD+CD25high T细胞。分两组进行细胞培养:A.单纯CD4+CD25-T细胞培养；B.CD4+CD25-T细胞与CD4+CD25hig T细胞按照2:1混合培养。两组细胞均在10ug/ml Derpl抗原刺激下培养6天,然后通过检测细胞增殖(CCK-8)和细胞因子(ELISA)来评价外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞功能。
结果:过敏性鼻炎患者组与健康对照组比较,CD4+CD25-T细胞表现出更强的增殖能力(P<0.05),细胞因子IL-4的产生也显著增多(P<0.01)；两组中CD4+CD25high T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖及Th1细胞因子(IFN-γ)产生均有明显的抑制作用(均为P<0.05)。相反,两组中的CD4+CD25highT细胞却未表现出对Th2细胞因子(IL-4)的抑制作用。
结论:CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在过敏性鼻炎患者外周血中功能与健康对照组比较无差异。
第三部分分泌IL-10调节性T细胞抗原特异性免疫抑制研究
目的:本部分旨在以健康作为研究对象,对其外周血中的Tr1细胞的抗原特异性免疫抑制作用进行研究。
方法:选择健康志愿者(6例),经静脉穿刺抽取肝素抗凝血30ml,通过免疫磁珠分选分泌IL-10 T细胞(Tr1细胞)。分为三组进行细胞培养:A.单纯PBMCs培养；B.单纯去除Tr1细胞的PBMCs培养；C.将去除Tr1细胞的PBMCs与Tr1细胞按照50:1混合培养。在10ug/ml Der pl抗原刺激下培养3天,分别通过检测细胞增殖(CCK-8)和细胞因子水平(ELISA)来评价外周血中Tr1抗原特异性免疫抑制作用。
结果:健康对照组中去除Tr1细胞的PBMCs组与PBMC组相比较,表现出的明显细胞增殖及细胞因子(IL-4和IFN-γ)的产生(均P<0.05)；而当去除Tr1细胞的PBMC与Tr1细胞按照50:1混合培养后,则可看到细胞增殖及细胞因子(IL-4和IFN-γ),)的产生被抑制(均P<0.05)。
结论:在健康个体中Tr1细胞具有抗原特异性的免疫抑制作用。
第四部分分泌IL-10调节性T细胞功能研究
目的:本部分旨在以健康对照组为对照,对过敏性鼻炎患者外周血中Tr1细胞功能进行检测。
方法:选择过敏性鼻炎患者(8例)和健康者(8例),经静脉穿刺抽取肝素抗凝血30ml,通过免疫磁珠分选出Tr1细胞。分为两组进行细胞培养:A.单纯PBMCs培养；B.将Tr1细胞与PBMCs细胞按照1:50比例混合培养。在10ug/mlDer pl抗原刺激下培养3天。通过检测细胞增殖(CCK-8)和细胞因子(ELISA)来评价外周血中Tr1细胞功能。
结果:两组中PBMCs增殖比较无统计学差异,当加入Tr1细胞后两组对PBMCs增殖均表现出明显的抑制作用；过敏性鼻炎组与健康对照组比较:PBMCs分泌IFN-γ,IL-4升高(分别P<0.01,P<0.001),IL-10分泌降低(P<0.001),当加入Tr1细胞后过敏性鼻炎组和健康对照组均表现出明显的抑制IFN-γ的产生(分别P<0.01,P<0.05),健康对照组表现出显著抑制IL-4的产生(P<0.05),但过敏性鼻炎组未表现出明显抑制IL-4作用(P=ns),同时加入Tr1细胞后两组产生IL-10水平无统计学差异(P=ns)。
结论:在过敏性鼻炎患者外周血中Tr1细胞抑制Th2细胞因子产生的作用可能下降。