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果梅(Prunus mume Sieb.et Zucc)是原产于中国的特色果树品种,我国果梅种质资源丰富,已有7000多年的栽培历史,《中国果树志·梅卷》记载有197个果梅品种。本实验首次采用AFLP分子标记技术对广东57个果梅品种进行种质鉴定、分子分类及遗传多样性等方面的研究。主要研究内容如下:
(1)对比应用4种DNA提取方法(改良CTAB法、改良SDS法、CTAB常规法、SDS常规法)提取果梅叶片基因组DNA,均能获得较好的效果。综合分析表明,改良CTAB法因其步骤简单、快捷,得到的基因组DNA降解少、杂质含量低,能获得高质量的DNA模板,通过对所得到的基因组DNA模扳进行AFLP分析,能获得清晰的DNA指纹图谱。
(2)从64对引物组合中筛选出8对引物E-AAC+M-CAA;E-AAC+M-CAT;E-AAC+M-CTC;E-AAG+M-CAA;E-AAG+M-CAC;E-AAG+M-CTA;E-AAG+M-CTC;E-AAG+M-CTG(扩增信号强度一致性好,条带分布比较均匀),对57个果梅品种进行AFLP多态性分析,一共得到扩增位点5069个,其中多态性位点1203个,多态性比例为23.73%,说明在分子水平上,这57个果梅品种的遗传多样性并非形态学性状所体现的那样丰富。
(3)应用AFLP技术对57个果梅品种的DNA扩增结果进行UPGMA聚类分析,其相互之间的相似系数范围为0.56~0.90,多态性比例介于0.1429~0.4259间,表明这57个果梅品种之间遗传关系相对较远,各品种是平行演化的。依相似系数0.75的水平,可以将所研究的57个果梅品种分成8组,与现有的果梅分类方法基本相似。
(4)结合形态学特征和本实验结果,表明应用AFLP标记技术对这57个果梅品种的亲缘关系的分析是可行的,能够较为准确的反映不同品种之间的亲缘关系。