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目的：利用原核表达系统表达带两种融合标签的骨桥蛋白(OPN)并进行纯化，用于后续的免疫及筛选，制备相应的单克隆抗体。 方法：利用Lasergene软件分析骨桥蛋白基因，从人肝癌组织中提取的总RNA，通过逆转录、PCR等技术扩增出此段骨桥蛋白基因。将回收纯化的PCR产物与带有His标签的pET-32a和GST标签的pGEX-4T-1两种载体重组，转化DH5α菌进行基因克隆再利用基因测序验证，获得重组质粒。利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转化重组质粒的大肠杆菌BL21，优化诱导条件并构建出适宜的表达体系。在构建的大肠杆菌表达系统中，选择高表达的工程菌进行大量诱导表达重组蛋白，利用SDS-PAGE对产物进行分析。产物经反复冻融超声破菌，再对上清液进行亲和层析可得纯化的重组蛋白，最后进行Western blotting鉴定。 结果：成功克隆了OPN基因，构建出重组质粒pET-32a-OPN和pGEX-4T-1-OPN，建立了呈高表达的工程菌BL21-pET-32a-OPN和BL21-pGEX-4T-1-OPN，表达和纯化了带两种标签的OPN融合蛋白。 结论：成功利用大肠杆菌体系表达了两种标签的OPN融合蛋白，经纯化后可用于后续制备抗OPN单克隆抗体的免疫和筛选，为研制出肝细胞癌早期诊断试剂盒奠定了基础。