【摘 要】
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该研究用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒,从尿囊液中提取病毒基因组总RNA,参考GeneBank中对应基因片断的核苷酸序列设计HA和NP基因片断特异性引物,用反转录-聚合酶链反
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该研究用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒,从尿囊液中提取病毒基因组总RNA,参考GeneBank中对应基因片断的核苷酸序列设计HA和NP基因片断特异性引物,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别扩增出禽流感病毒2个基因片断的cDNA.其中HA和NP基因均未经限制性酶切分析直接克隆,重组质粒经限制性酶切分析后,用于测序.将测定的序列与参照序列对比,视其同源性高低来判断该序列是否为所测定的基因片断的核苷酸序列.其结果表明扩增到的基因片断均包含相应的病毒基因片断的完整开放阅读框架、起始和终止密码子.序列测定完成后,把测定序列录入计算机,运用DNAStar生物软件对核苷酸序列进行同源性和遗传进化分析.从GeneBank中读取了从鸡、鸭、鹅等分离到的具有代表性的禽流感病毒分离株的核苷酸序列和氨基酸序列,和作者禽流感病毒分离株进行同源性分析.我们所分离的禽流感流行株(H5N1)因地域的不同、时间的差异,宿主的不同,禽流感病毒HA基因核苷酸序列的同源性在96.0％-99.7%之间,推导的氨基酸序列的同源性在95.8%-99.6%之间,说明中国禽流感病毒可能已经发生部分变异.为深入阐明中国部分地区禽流感病毒流行株的HA和NP基因的进化关系,以及内部基因的遗传演化过程,运用DNAStar生物软件进行遗传演化研究.该研究通过鸡胚法对抗流感病毒中药筛选,再针对禽流感病毒的复制特点和致病机理,从抗感染,调节机体免疫功能和改善症状等方面辩证组方,研制抗流感病毒的中药抗病毒合剂,按照不同剂量拌料饲喂,研究抗病毒合剂对机体免疫功能的影响.同时根据上述试验,选出最佳中药剂量,用于禽流感的防治研究.该试验测试的指标包括白细胞总数、T淋巴细胞百分率、红细胞的免疫功能.结果表明,中药抗病毒合剂能显著提高白细胞总数、T淋巴细胞百分率,增强红细胞免疫功能.在AIV的防治试验中,抗病毒合剂对AIV具有直接杀灭作用,无论对鸡胚先接毒,后用药,还是先用药,后接毒,或病毒与中药同时接种鸡胚,抗病毒合剂均能抑制禽流感病毒在鸡胚内的增殖,降低其毒力或使其毒力完全丧失;动物实验表明,抗病毒合剂能有效降低感染鸡的发病率、死亡率,有效率达93.74%,并能延长重症鸡的死亡时间,该实验研究表明抗病毒合剂不仅可以增强机体的免疫功能,提高机体的抗病力,而且可以有效防治禽流感.
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