【摘 要】
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分别用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达的重组猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TGEV)S蛋白和含有猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因主要抗原位点的重组质
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分别用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达的重组猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TGEV)S蛋白和含有猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因主要抗原位点的重组质粒PCI-Sa免疫BALB／c小鼠，按常规方法进行细胞融合。间接ELISA方法进行筛选，前者筛选抗原为TGEV细胞培养物上清；后者筛选抗原为纯化的乳酸乳球菌表达重组TGEV S蛋白。采用有限稀释法，经过三次克隆，最终前者获得两株抗TGEV S蛋白的杂交瘤细胞株(C7C882和B5G8G7)；后者获得一株抗TGEV S蛋白的杂交瘤细胞株(E6D9A12)。三株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体亚类分别为IgM、IgM、IgG2a类，杂交瘤细胞体外长期培养和冻存均不影响抗体的分泌。杂交瘤细胞的平均染色体数为88±10对，用相应的筛选抗原经间接ELISA检测C7C882、B5G8G7、E6D9A12细胞培养上清的抗体效价分别为1：200、1：100、1：500，腹水抗体效价分别为1：2×10~5、1：1×10~4、1：6×10~5。以猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)细胞培养物上清液为抗原，与三株杂交瘤细胞上清经间接ELISA检测结果显示，这三株单抗与TGEV显示良好的特异性，而与PEDV、PRV和PrV不存在交叉反应。说明获得的单抗具有高度的特异性。用实验获得的单克隆抗体和SP2／0细胞培养上清对感染TGEV的ST细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究：间接免疫荧光染色后，与单抗作用的细胞培养物中，多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色闪亮荧光，且荧光强度强，与SP2／0细胞培养上清作用的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光，结果表明，利用所制备的抗TGEV S蛋白的单克隆抗体进行间接免疫荧光对病原检测具有较高的特异性。以纯化的TGEV为抗原，Dot-ELISA检测实验获得的单克隆抗体与TGEV的反应性，结果三株杂交瘤细胞上清与TGEV反应均出现灰色印记，可判定为阳性；与SP2／0细胞上清反应为阴性。证明单克隆抗体与TGEV具有特异性反应。上述实验结果均表明，所制备的抗TGEV S蛋白的单克隆抗体对病原检测具有较强的特异性，为TGEV病原特性的基础性研究和病原的快速检测提供了重要的物质基础。
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