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研究背景:
EMI(endometrial-myometrial interface,EMI)是近年来发现的存在于子宫内膜与外周肌层之间的特殊解剖学区域。研究显示,子宫腺肌病(adenomyosis,ADS)中存在EMI结构与收缩功能调节的异常,而目前对导致上述结构与功能异常的机制尚未完全明了。ADS作为激素依赖性疾病,其发生与雌激素的调节紊乱有关,而雌激素受体-α(estrogen receptor α,ERα)与ADS中内膜侵袭过程以及平滑肌细胞收缩的调控有关。究竟ERα在ADS子宫EMI中的表达与非ADS子宫EMI有何差异,这些差异与EMI结构与收缩功能异常有何联系,尚需进行研究探讨。
目的:
通过对EMI的初步定位,分离子宫EMI平滑肌细胞进行原代培养,分别在mRNA水平和蛋白质水平分析ERα在子宫腺肌病EMI平滑肌细胞中的表达,探讨其在腺肌病EMI病理生理改变中的意义。
材料与方法:
1.病例选择:选取自2009年5月～2009年11月在首都医科大学附属北京妇产医院妇科微创中心行全子宫切除术获取的子宫标本,分为:
(1)ADS组:术前诊断ADS并经术后病理证实者,共20例,年龄39～52岁,中位年龄45岁,月经周期规律,其中子宫内膜增殖期9例,分泌期11例。
(2)对照组:术前诊断子宫肌瘤并经术后病理证实除外ADS者,共21例,年龄40～53岁,中位年龄48岁,月经周期规律,其中子宫内膜增殖期11例,分泌期10例。排除标准:合并子宫内膜异位症、子宫内膜息肉、子宫粘膜下肌瘤、糖尿病、甲状腺功能亢进、肾上腺功能亢进等疾病,术前3个月使用激素治疗及放置宫内节育器者。
2.研究方法
(1)EMI的初步定位与分析:取子宫体部子宫内膜及其下方肌层组织,大小约1×1×1cm3,制成石蜡标本,通过ER的免疫组化染色方法在光学显微镜下(×100)结合解剖学定义,对EMI进行初步定位分析；
(2)EMI平滑肌细胞的原代培养:取子宫体部子宫内膜及其下方肌层组织,大小约1×1×1cm3,根据上述石蜡标本的初步定位结果,在EMI区域内进行组织取材,并对上述平滑肌细胞进行原代培养及鉴定；
(3)ERα表达的检测:通过RT-PCR和Western Blot方法,分别在mRNA水平及蛋白质水平检测上述培养的平滑肌细胞中ERα的表达差异。
结果:
1.EMI的初步定位与分析:
ER广泛分布于子宫内膜层与平滑肌层,其中内膜层分布最多,EMI次之,外周肌层最少(图2)；
EMI在免疫组化染色片下,ER染色程度介于内膜层与外周肌层之间,按解剖部位由内向外染色程度递减,根据EMI的解剖学定义及上述染色结果,基本可与外周肌层分辨；
2.EMI平滑肌细胞的原代培养:
EMI平滑肌细胞于培养后48～72h即贴壁生长,细胞群呈长梭形,细胞群呈束状或栅栏状排列,细胞生存力良好(图3)；
3.ERα表达的检测:
(1)ERα在mRNA水平的表达:
在ADS组的EMI平滑肌细胞中(图4),ERα mRNA在增殖期(0.1867±0.02344)与分泌期(0.1742±0.03192)的表达差异无统计学意义(P>0.05)；
在对照组的EMI平滑肌细胞中(图4),ERα mRNA在增殖期(0.1887±0.02434)与分泌期(0.1178±0.01504)的表达存在周期性变化,其中增生期高于分泌期(P<0.05)；
在内膜增生期,ERα mRNA在ADS组与对照组EMI中的表达差异无统计学意义:在内膜分泌期,ADS组的表达高于对照组,但两者间的差异无统计学意义(P>0.05)。
(4)ERα在蛋白质水平的表达:
在ADS组的EMI平滑肌细胞中(图5),ERα蛋白在增殖期(0.2578±0.03833)与分泌期(0.2691±0.04437)的表达差异无统计学意义(P>0.05)；
在对照组的EMI平滑肌细胞中(图5),ERα蛋白在增殖期(0.3573±0.06116)与分泌期(0.2118±0.03573)的表达存在周期性变化,其中增生期高于分泌期(P<0.05):
在内膜增生期,ERα蛋白在ADS组与对照组EMI中的表达差异无统计学意义；在内膜分泌期,ADS组的表达高于对照组,但两者间的差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:
1.EMI是有别于子宫内膜和外周肌层的特殊解剖学区域,探讨并研究EMI的定位方法,可为今后对该区域组织及细胞功能的研究提供前期基础。
2.EMI平滑肌细胞在体外的成功培养存活,并且具有良好的生存力,将有助于了解EMI平滑肌细胞的功能及其在子宫腺肌病中的作用。
3.在子宫腺肌病中,雌激素受体-α在子宫EMI平滑肌细胞中的表达无周期性变化,呈持续高水平表达,与子宫腺肌病的发生发展密切相关。