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研究目的： 探讨腺病毒介导 Tum5重组基因的体外表达及其对高糖条件下恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖、移行、管腔形成的影响；观察其对氧诱导视网膜病变（oxygen-induced retinopathy，OIR）模型视网膜新生血管的作用，并初步探索其可能机制。 研究方法： 将前期研究中获得的原重组Tum5质粒载体（pCMV-Tum5-MCS）进行腺病毒包装，获得重组Tum5基因腺病毒颗粒即rAd-Tum5。基因测序检测目的基因。纯化病毒载体，以 TCID50法检测滴度。感染 RF/6A细胞并通过倒置荧光显微镜及流式细胞学技术观察其感染效率。以Western blot检测Tum5的表达情况。 将 RF/6A分成四组：（1）正常组；（2）高糖对照组；（3）rAd-GFP空载体组；（4）rAd-Tum5组。待细胞贴壁后，对rAd-GFP空载体组和rAd-Tum5组分别行病毒载体感染，正常组及高糖对照组不做处理。24小时后，rAd-GFP空载体组、rAd-Tum5组及高糖对照组于高糖条件下培养，正常组常规培养。培养一定时间后通过CCK-8细胞增殖实验、Transwell细胞迁移实验和Matrigel管腔成形实验检测血管内皮细胞的增殖、移行、管腔形成。 通过构建OIR小鼠模型研究视网膜新生血管。将七日龄的C57BL/6J小鼠随机分为四组：（1）正常组；（2）OIR对照组；（3）rAd-GFP空载体组；（4）rAd-Tum5组。将后三组置于高氧浓度的密闭氧舱饲养5天，OIR对照组玻璃体腔注入无菌生理盐水，rAd-GFP空载体组与rAd-Tum5组分别注入rAd-GFP与 rAd-Tum5。空气环境中饲养再饲养5天。通过视网膜FITC-右旋糖酐造影，视网膜铺片观察视网膜无灌注区及新生血管；H&E染色切片观察视网膜前细胞核数量；免疫荧光冰冻切片观察视网膜中VEGF的变化。研究Tum5肽对视网膜新生血管的抑制作用，并初步探讨其可能的作用机制。 结果： 成功构建携带有绿色荧光标签蛋白（ GFP）的重组腺病毒表达载体（即rAd-Tum5）。基因测序结果证实该腺病毒载体中的Tum5基因片段与原设计基因序列一致。纯化后 rAd-Tum5与 rAd-GFP病毒滴度分别达到1×1011pfu/ml和2×1011pfu/ml。流式细胞技术结果显示rAd-Tum5和rAd-GFP对RF/6A细胞的感染效率分别为50％和55%。Western blot结果也提示Tum5肽在体外成功表达。 体外实验中，CCK-8示：与 rAd-GFP及高糖对照组（P>0.05）相比，rAd-Tum5组细胞增殖显著降低（ P<0.05）；Transwell结果示：rAd-GFP及高糖对照组（P>0.05）细胞迁移数目较正常组显著增多（P<0.05）；而 rAd-Tum5组却明显减少（P<0.05）；Matrigel结果示：rAd-GFP及高糖对照组（P>0.05）的管腔形成数量较正常组明显增多（P<0.05），rAd-Tum5组较rAd-GFP及高糖对照组显著减少（P<0.05）。Western blot结果示Tum5重组基因可以在体外成功表达。 体内实验中，成功构建OIR小鼠模型。视网膜FITC造影结果示：OIR小鼠视网膜可见明显的无灌注区，边界可见大量新生血管，伴有大血管迂曲变形；比较组间无灌注区面积比例，差异有统计学意义（F=61.224，P＜0.01）。OIR组与rAd-GFP组差异无统计学意义（P>0.05）；rAd-Tum5组与OIR组、rAd-GFP组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）；H&E染色示：四组间视网膜前细胞核数比较，差异有统计学意义（F=635.738，P＜0.01），rAd-GFP组与 OIR组差异无统计学意义（P>0.05），rAd-Tum5组与OIR组、rAd-GFP组相比差异有统计学意义（P＜0.01）；Western blot与免疫荧光染色结果示：OIR组及rAd-GFP组的VEGF表达量较正常组明显上调，而rAd-Tum5组较前两组明显下调。Western blot结果示Tum5肽可以在体内成功表达。 结论： 重组的 Tum5基因腺病毒载体能够高效的感染目的细胞并成功在体内外表达，提示Tum5基因可以通过基因转染的方式在体内外表达。腺病毒介导的Tum5重组基因能够抑制高糖条件刺激的 RF/6A细胞增生、迁移及管腔形成。此外，重组rAd-Tum5基因能够明显抑制OIR小鼠模型的视网膜新生血管生成，并同时减少无灌注区面积，其机制可能与下调视网膜中VEGF的表达有关。