小鼠窦房结组织与心房肌、心室肌组织MicroRNA表达谱差异研究

• 作 者: 赖前成
• 机 构: 西南医科大学
• 出 处: 泸州医学院 西南医科大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: MicroRNA 小鼠 窦房结 心房肌 心室肌

目的：对昆明小鼠窦房结、心房肌、心室肌组织中的MicroRNAs表达谱差异进行对比研究。方法：1.窦房结、心房肌、心室肌取材预实验,确保解剖定位准确：选取10只出生60-90天体重为35-45g之间健康昆明小鼠,不拘雌雄,麻醉后按解剖定位取下窦房结组织,左心耳组织,心室肌组织进行石蜡包埋后连续切片,层厚约2μm,将切下组织进行HE染色后光学显微镜下观察,确定取材部位准确无误后,进行实验取材。2.取材：选取180只出生60-90天体重为35-45g之间健康昆明小鼠,不拘雌雄,分两次取材,每次取材90只,每只分别对窦房结、心房肌、心室肌组织取材。采用经预实验修正和确认的解剖定位方法进行窦房结取材,心房肌及心室肌取材分别为左心耳和心尖部。本实验采用解剖定位取材,并将对所取窦房结组织进行鉴定。3. MicroRNAs表达谱差异检测：将批量取材组织分类标记后送检进行总RNA提取,经检测所提RNA质量后与MicroRNA芯片杂交,芯片经荧光图像扫描后进行数据筛选出特异性MicroRNAs。结果：1.取样组织进行切片HE染色结果显示：其中9只小鼠窦房结组织取材完整,另1只小鼠取材含大部分窦房结组织,所取窦房结组织细胞胞质淡染,少量细胞聚集,细胞核大而圆,呈中心性分布,无横纹,周围较多纤维结缔组织包绕,其间可见窦房结动脉。2.小鼠窦房结解剖定位是以界嵴为纵轴线,上腔静脉与右心房交界处1.5×2×1 mm3范围。3. MicroRNA芯片检测结果显示：窦房结组织较左心室、左心房组织中mir-214, mir-147, mir-1900等12种microRNAs表达明显(超过2倍)上调,表达显著(超过2倍)下调的有mir-654、mir-3968、mir-467b、mir-3081、mir-142、mir-1894、mir-497、mir-5114、mir-346、mir-3096a等27种MicroRNAs。结论：1.小鼠解剖定位方法能准确获取窦房结组织。2.窦房结、心房肌、心室肌组织的MicroRNAs表达谱检测方法科学可靠。3.与心房肌和心室肌组织比较,mir-214, mir-147, mir-1900等12种MicroRNAs在小鼠窦房结组织中表达显著上调(超过2倍),mir-654、mir-3968、mir-467b等27种MicroRNAs在窦房结组织中的表达显著下调(超过2倍),这些microRNAs可能在心脏干细胞分化方向的调控中具有一定作用,值得进一步深入研究。