【摘 要】
：
背景：肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率高居恶性肿瘤的第二位，是目前发病率高、治疗困难、预后极差的恶性肿瘤，目前我国每年约有10万新诊断的肝癌患者，另每年约有12万人死于肝癌，占全球肝癌死亡数的45％。由于肝癌起病隐匿，绝大多数的肝癌发现时已是晚期而无法手术，临床上肝癌的手术切除率仅为20％。近年来随着肝癌介入化疗的普遍开展，中晚期的肝癌患者的5年生存率有了明显的提高。肝癌介入治疗所使用的化
论文部分内容阅读
背景：
肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率高居恶性肿瘤的第二位，是目前发病率高、治疗困难、预后极差的恶性肿瘤，目前我国每年约有10万新诊断的肝癌患者，另每年约有12万人死于肝癌，占全球肝癌死亡数的45％。由于肝癌起病隐匿，绝大多数的肝癌发现时已是晚期而无法手术，临床上肝癌的手术切除率仅为20％。近年来随着肝癌介入化疗的普遍开展，中晚期的肝癌患者的5年生存率有了明显的提高。肝癌介入治疗所使用的化疗药物大都具有明显的毒副作用，在作用于肿瘤组织的同时，会损伤正常的组织器官，从而造成患者肝功能、肾功能等损害，甚至危及患者生命。寻找新的高效低毒的药物并应用于肝癌的化疗，已是摆在我国和全世界医药工作者面前的急需解决的一道难题维生素是一类临床上应用广泛的药物，价格低廉。已有研究表明，维生素B6、C、K3均有抑制多种肿瘤细胞生长的作用，对正常细胞几乎无毒副作用，维生素B6可直接损伤肿瘤细胞使其坏死，维生素C、K3单药使用可诱导肿瘤细胞凋亡，维生素C与K3联用则会发生另外一种死亡方式，即“胞质自切”现象，这些现象背后的分子机制有待进一步的研究。
目的：
1.观察维生素B6、C、K3单独及联合作用对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用，从而明确三种维生素的药物效果。
2.从形态学上、基因表达改变上分辨凋亡与胞质自切的差异，进一步认识胞质自切的本质。
3.检测三种维生素对细胞周期及AFP含量、γ-GT活性的影响，为三种维生素应用于肝癌治疗提供理论依据。
方法：
1.人类肝癌细胞株HepG2的维持培养及扩大培养：用台盼蓝染色后检测HepG2细胞活率，并选择细胞活率在95％以上进行传代培养；
2.光镜及瑞氏染色下观察B6、C、K3单独及联合作用对HepG2细胞形态学的改变；MTT法检测各组细胞增殖抑制率差异，并选择合适的药物浓度和药物作用时间进行下一步实验。
3.流式细胞术检测B6、C、K3单独及联合作用于HepG2细胞后细胞周期的变化。
4.放射免疫法测定分泌型AFP含量，化学比色法测定胞浆γ-GT活性。
5.RT-PCR法检测B6、C、K3作用后细胞P53、BCL-2、PTEN、VEGF、MMP-2mRNA水平的表达。
结果：
1.肝癌细胞生长良好，呈贴壁生长，多为长梭形，生长迅速，细胞生长密集时可多层重叠生长。
2.维生素B6、C、K3抑制HepG2细胞增殖，其抑制效应与药物浓度、作用时间有关；形态学改变上，呈现三种死亡方式，B6组表现为细胞坏死，高浓度C组和K3组表现为细胞调亡，CK3联用组则表现胞质自切的形态学改变；B6与C或K3联用对细胞增殖抑制有协同作用。
2.流式细胞术检测发现，CK3联用组和B6CK3联用组的Gl峰前出现亚二倍体峰，另外，B6、C、K3单独及联用组的Gl期细胞比例增加，S期细胞减少，细胞被阻滞于Gl期，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。
3.维生素B6、C、K3作用后HepG2肝癌细胞后分泌型AFP含量减少、除VC组外，其他各组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，γ-GT活性下降，除K3组外，其余各组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
4.RT-PCR法检测发现，维生素C和K3可引起HepG2细胞P53mRNA表达升高，BCL-2，VEGF、MMP-2表达下降，呈剂量依赖性，CK3联用组和B6CK3可使VEGF、MMP-2表达明显下降，P53和PTENmRNA表达变化不明显。
结论：
1.维生素B6、C、K3可抑制HepG2细胞增殖，呈剂量依赖性和时间依赖性。C和K3联用可明显加强抑制，B6与C、K3联用时，有协同抑制作用。
2.形态学分析，B6直接损伤细胞导致细胞坏死，大剂量C、K3可诱导HepG2细胞凋亡，而CK3联合组可使HepG2发生“胞质自切”现象，进而导致细胞死亡。“胞质自切”对肿瘤细胞的抑制效果明显。胞质自切不伴有凋亡基因表达改变，但伴有肿瘤转移相关基因改变。
3.AFP和γ-GT是公认的反应人肝癌细胞的增殖标志，是观察药物逆转肝癌恶性表型的检测指标，维生素B6、C、K3在抑制细胞增殖同时直接影响AFP分泌和γ-GT的活性，提示其具有逆转肝癌恶性表型的作用，值得进一步探讨。
其他文献
甲状腺癌（thyroid carcinoma,TC）在甲状腺恶性肿瘤中最为常见，在全身恶性肿瘤中所占比率约为1%。TC的病理类型可以分为四种，分别是乳头状癌、滤泡状癌、未分化癌及髓样癌。但近年来TC的发病率呈现逐年攀升趋势，近30年以来，TC发病率已经升高接近3倍，2015年中国新发TC发病率达到90例/10万人，并且晚期难治性TC患者数量亦呈现逐年增多趋势。 乳头状甲状腺癌（papillary
随着我国城市化、工业化及大气污染日益加重、老龄化进程的加快,肿瘤发病率和死亡率都呈现出逐年加速上升趋势。在2017年第十四次全国放射肿瘤学学术年会上，中国科学院郝捷院士代表国家癌症中心发布了《中国肿瘤的现状及趋势》，报告显示中国肺癌发病率在男性中位居首位，女性中位居第二位，肺癌死亡率男、女性均居首位，占前7位恶性肿瘤死亡人数的21.68%，而且四十岁之后随着年龄的增长，中国男、女发病率及死亡率与年
背景：耳聋是最常见的致残性疾病之一，可导致语言交流障碍，严重影响生存质量。在世界范围内，先天性耳聋患儿的出生率为1-3‰；我国每年有3万左右聋儿出生，其中大部分为重度、极重度感音神经性耳聋。耳聋病因复杂，有环境因素、遗传因素，或环境因素和遗传因素共同作用的结果。据文献报道，60%的耳聋患者为遗传因素所致。遗传性耳聋中，70%为非综合征型耳聋，30%为综合征型耳聋。非综合征型耳聋的相关基因很多、突变
目的: 针对我国心脏瓣膜病人的特点,应用自制量表对心脏机械瓣膜置换术后患者生存质量进行调查,了解其生存质量情况,对比手术前后生存质量的不同和术后变化的趋势,为临床治疗和患者的健康教育提供依据。 病例和方法: 本文选择了2006年5月至2007年5月间在我院心胸外科行人工机械瓣膜置换术的83位患者作为调查对象,应用自制心脏机械瓣膜置换患者专用量表QOLQ-MVR(quality of life
背景与目的高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papillomavims，HR-HPV)感染是宫颈癌主要的致病因素，目前，新的HR-HPV DNA检测技术和薄层液基细胞学(liquid-based thinprep cytology test，TCT)，提高了子宫颈癌和癌前病变的检出率，但是，HR-HPV检测对宫颈鳞状上皮内高度病变(high-grade squamousinte
目的：本文将介绍并探讨应用“AO”锁定钢板(LISS接骨板)外固定方法治疗胫腓骨骨折的临床应用，手术方法，适应证及手术技巧与体会。 方法：自2006年5月至2007年12月，我们采用“AO”锁定钢板(LISS-DF型)外固定治疗胫腓骨骨折38例。术后康复训练计划根据患者的具体情况个体化，提倡早期功能锻炼。 结果：本组38例病人随访5个月～13个月，平均8个月。全部病例均解剖复位或功能复位，无内
先天性白内障是指在胚胎发育过程中由于多种因素导致的晶状体形态或功能发育异常，具有显著的临床和遗传异质性，临床表现多种多样且致病基因众多，对其进行精准高效的遗传学筛查显得尤为必要。目标区域外显子捕获测序技术能够有效筛查先天性白内障的致病基因，是快速有效地发现遗传性疾病的检测方法。本课题收集了一个先天性白内障大家系的信息和血样，应用目标区域外显子捕获测序筛查白内障致病基因，分析突变位点的生物信息学特征
目的：研究兔肺VX2肿瘤微波消融前后MRI信号变化与病理表现的相关性，通过定量分析对比微波消融前后瘤灶、消融灶及周围正常肺组织水含量，研究VX2肿瘤微波消融前后MRI的信号变化机制。 方法：总计23只新西兰雄性大白兔，随机选取2只，在双侧后腿肌肉组织内接种VX2瘤株，使之成瘤并传代，建立兔肺VX2肿瘤模型。随机处死1只瘤兔行病理证实。将17只成瘤兔随机分成A、B及C共3组，各组分别为3只、7只，
目的： 宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一。随着子宫颈脱落细胞学筛查和HPV检测的普遍应用，宫颈癌及其癌前病变得以早期发现、早期诊断、早期治疗，但仍有部分患者出现晚期转移或复发。目前宫颈癌是以手术及放疗为主、化疗为辅的综合治疗。针对局部中晚期宫颈癌，手术治疗除了相对并发症较多外，可能仍存在残存病灶的机会；传统的单纯根治性放疗与术前放疗对鳞癌效果尚可，对腺癌的生存率无明显提高，尤其对肿瘤直径≥4cm的局
目的：通过对常染色体显性遗传性多囊肾病(autosomaldominant polycystic kidney disease， ADPKD)患者两肾。Tc-DTPA动态显像中图像表现和GFR数值的分析，探讨该病患者肾动态图像以及肾小球滤过率(GFR Glomerular filtration rate)的变化规律。方法：对106名患者们Tc-DTPA肾动态显像检查结果进行回顾性分析，其中确诊的A