流感病毒和西尼罗病毒囊膜蛋白重要结构域的研究

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhanghongyingyxl
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流感是由RNA病毒引起的、流行于人群和多种其它动物中的急性、高度传染性疾病。流感病毒的快速变异导致流感病毒疫苗的研发一直滞后,同时,多种亚型的流感病毒出现了耐药毒株,因此,迫切需要研制新型的流感病毒抑制剂。依据流感病毒血凝素蛋白HA在诱导膜融合前后的构象变化特点,设计并合成了覆盖HA蛋白融合亚单位HA2的α-螺旋区的10条多肽(HP1-HP10),利用噬斑减少实验和病毒增殖抑制实验,筛选出一条能特异地抑制至少H1、H3和H5三个亚型的流感病毒的多肽HP1。该多肽可以减少病毒噬斑的形成,降低病毒在感染细胞上清中的滴度。利用流感病毒感染小鼠的动物模型证实,该多肽对感染小鼠的保护率是100%。表达在真核细胞膜上的多肽HP1和HP10都具有抑制流感病毒感染MDCK细胞的效果,但没有检测到表达HP1或HP10多肽的重组腺病毒感染的MDCK细胞对流感病毒感染的抑制作用。为了避免化学合成多肽的缺点,论文还利用大肠杆菌表达系统表达了由HP1和HP10交替串联而成的三种重组蛋白HR121、HR212和HR12121,其中HR121和HR12121蛋白对三种病毒有一定的抑制作用。本研究提出以流感病毒的融合蛋白HA构象变化为靶标,设计并鉴定出对流感病毒具有广谱抑制活性的多肽和重组蛋白,对其进一步优化和改造可望为新型抗流感病毒的药物研制打下良好的基础。   近几年在美国暴发的西尼罗病毒(WNV)已经迅速传播到世界多个国家和地区,具有较高的发病率和死亡率,成为严重威胁人类健康的病毒性疾病。为了建立有效的WNV检测方法,本研究制备了四株抗WNV囊膜蛋白第三结构域(EDIII)的单克降抗体,鉴定了抗体的亚型、抗体和变性及非变性抗原结合的强度、抗原和抗体结合的亲和力常数,进行了免疫荧光分析、测定了抗原表位竞争、抗体的中和能力等,并检测了上述单抗与日本乙型脑炎病毒的交叉反应情况。用其中的两株单抗483和2F5建立的抗原捕获ELISA体系检测WNV感染细胞上清液的灵敏度为3.95TCID50/0.1 ml。上述四种单抗与在中国流行的日本脑炎病毒没有交叉反应,因此可以用于建立敏感、方便、快捷的WNV检测试剂盒,尤其适用于JEV流行的地区。此外,用重组EDIII蛋白免疫小鼠后,在血清中检测到的WNV特异性抗体,证实了本研究制备的重组EDIII蛋白可作为预防WNV的候选疫苗。
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