论文部分内容阅读
鳙起源于亚洲东部地区，主要分布在我国的长江和珠江流域。近年来，自然环境及养殖条件的变化导致鳙种质资源衰退。开展鳙耐低氧性状的基因组学研究有助于理解鳙应对低氧逆境的生理和遗传调控机制，同时对选育鳙抗逆品种有潜在的应用价值。本研究围绕鳙耐低氧性状开展了两个方面的研究，主要研究结果如下: 利用cDNA-AFLP技术进行鳙低氧胁迫差异表达研究，共获得转录衍生片段(TDF)10571条。检测到的差异表达TDF数目为228个，其中低氧胁迫后上调表达TDF141个(62％)，下调表达TDF87个(38％)。对克隆得到的70个差异TDF进行序列分析后发现:29个TDF在数据库中未检索到同源序列;9个TDF比对到未知功能序列;32个TDF比对到已知生物学功能的序列，共功能包括转录调控、应激和信号转导、能量代谢、蛋白质合成、免疫防御以及细胞生长与增殖。选取4个已知功能的TDF(ANXA6、TRIM25、Tnp和RBAT)进行qRT-PCR验证，结果显示:ANXA6、TRIM25和Tnp在低氧胁迫后的表达模式与AFLP分析结果一致，RBAT与AFLP分析结果不一致。这些结果为揭示鳙应答低氧胁迫的分子调控机制提供了参考信息。 克隆得到鳙TET1基因，其cDNA全长5714 bp，编码1782个氨基酸。鳙TET1氨基酸序列包含CXXC锌指结构和Tet JBP超家族保守结构域。氨基酸序列比对结果表明，TET1基因在脊椎动物中的保守性较低。qRT-PCR结果显示，TET1在脑的表达量最高，在皮肤和肌肉中不表达。我们分析TET1基因在低氧胁迫试验中的表达情况后发现:在脑中，TET1在低氧敏感组和耐低氧组的表达水平低于对照组和恢复组;在心脏和鳃中，耐低氧组中TET1表达水平显著高于低氧敏感组;然而在肾脏中，TET1表达水平未发生显著性变化。通过对鳙TET1基因的PCR片段测序分析，我们共检测到3个SNP位点(c.1269G＞A，c.2396T＞C和c.2706A＞C)。其中只有位点c.1269G＞A与鳙耐低氧性状显著相关，其GG基因型个体的耐低氧能力高于AA和AG基因型个体。上述结果为开展鳙耐低氧性状分子标记辅助育种研究提供了基础信息。