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粘红酵母菌Q0204为出发菌株,经紫外诱变,筛选到一株可以高产3’-磷酸二酯酶的温度敏感突变株QX0204。经摇瓶发酵,3’-磷酸二酯酶产量可达250U/mL发酵液,遗传稳定性良好。
通过摇瓶和5L自控发酵罐研究,此菌株最适培养及产酶温度为26℃,接种量为5%的条件下,发酵96小时,3’-磷酸二酯酶产酶量达到最大,此酶的发酵生产需氧。此菌株所产生的3’-磷酸二酯酶耐热性良好,在70℃保温60min仍可保持50%以上活力,此酶在60℃、pH5.4条件下,酶的活性最高。应用此酶生产3’-核苷酸的最佳反应条件为:底物浓度为3%,酶解温度为50℃,pH为5.0,每毫升底物酶用量为75U,时间3小时,3’-核苷酸转化率达71%。
用阴离子树脂可分离获得四种3’-单核苷酸,阴柱收率可达88%,经过炭柱脱盐,浓缩结晶,获得4种3’-单核苷酸。