【摘 要】
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目的呼吸道是人体与外界相通的开放性腔道,它时刻受到各种微生物及外界环境因素的刺激。有相关报告指出,与呼吸道感染相关的死亡率是总体死亡的第五大原因。而抗生素是治疗呼吸道感染最常用的方法。然而,大量使用抗生素可能会导致呼吸道共生菌群的紊乱,致使人体的免疫力降低,增加致病菌感染的机会。同时还会导致许多耐药菌株的产生。呼吸道共生菌与机体保持着共生关系,对宿主内免疫系统的平衡发挥着重要作用,呼吸道共生菌可以
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目的呼吸道是人体与外界相通的开放性腔道,它时刻受到各种微生物及外界环境因素的刺激。有相关报告指出,与呼吸道感染相关的死亡率是总体死亡的第五大原因。而抗生素是治疗呼吸道感染最常用的方法。然而,大量使用抗生素可能会导致呼吸道共生菌群的紊乱,致使人体的免疫力降低,增加致病菌感染的机会。同时还会导致许多耐药菌株的产生。呼吸道共生菌与机体保持着共生关系,对宿主内免疫系统的平衡发挥着重要作用,呼吸道共生菌可以通过拮抗作用来抑制呼吸道内其他病原菌的生长来对抗呼吸道疾病。所以细菌疗法可能在预防病毒性呼吸道感染方面是一种新的替代疗法,进而解决因滥用抗生素而导致的耐药菌株产生的问题。呼吸道共生菌本来就定植于人的健康呼吸道,作为益生菌的候选菌株具有独特的优势。呼吸道益生菌应该是从呼吸道共生菌群中选择合适的菌株进行深入且全面的研究。而菌株的黏附性能是筛选益生菌株的重要指标。本研究选用的是从健康儿童口咽部分离得到的两株上呼吸道共生菌,经鉴定分别属于链球菌属的新菌,分别命名为C-17和D-19,它们对常见的致病菌具有广谱拮抗作用。本研究的目的是通过体外建立细胞模型,探讨2株具有广谱拮抗作用的上呼吸道共生菌C-17及D-19本身的黏附特性及对病原菌的黏附抑制作用,为其作为呼吸道微生态制剂的研发提供基础研究。方法（1）利用分光光度法、BATH法、盐析凝聚法分别测定了C-17及D-19的自动聚集能力、形成生物膜的能力及疏水性,并在扫描电镜及普通显微镜下观察其黏附能力,通过这些指标评估了C-17及D-19对16-HBE细胞的黏附能力。（2）通过平板计数法测定了菌株C-17及D-19的黏附特性,即不同时间、不同浓度、不同灭活方式、不同生长阶段、不同p H值、不同化学试剂、不同糖溶液及代谢产物对菌株C-17及D-19黏附性能的影响。（3）首先通过荧光标记法和平板计数法评估菌株C-17及D-19对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的黏附抑制作用,即竞争抑制、排除抑制和置换抑制。接着利用平板计数法测定了不同处理因素（不同化学试剂）对致病菌黏附抑制的影响。结果（1）菌株C-17及D-19具有良好的自动聚集能力、形成生物膜的能力、疏水性,黏附性能。并且它们的自动聚集能力、形成生物膜的能力、疏水性、黏附性能四者成正相关。（2）菌株C-17及D-19均在2 h时黏附性能达到最大,大于2 h黏附能力不再显著增加（P＞0.05）;浓度为1×10~8 CFU/ml时黏附性能最大,大于1×10~8 CFU/ml时黏附性能不再显著增加（P＞0.05）;菌株C-17及D-19经不同温度灭活（65℃30 min、100℃10 min）后,它们的黏附性能同对照组相比显著下降（P＜0.05）;生长阶段为稳定期时黏附性能最大,大于对数期和衰退期（P＜0.05）;同p H4.0、5.0、6.0、8.0相比,p H值为7.0时黏附性能最大（P＜0.05）;经0.25 mg/ml胰蛋白酶、5 mol/l Licl、60 mg/ml高碘酸钠处理后,同对照组相比,它们的黏附性能均明显下降（P＜0.05）;分别添加甘露糖、葡萄糖、果糖、乳糖溶液后,同对照组相比,它们的黏附性能显著下降（P＜0.05）,菌株C-17尤以葡萄糖最为显著,菌株D-19尤以乳糖最为显著;同培养液上清相比,新鲜液体培养基或是PBS缓冲液悬浮菌体后,发现菌株C-17和D-19的黏附能力并未发生显著差异（P＞0.05）。（3）经荧光标记法和平板计数法得到菌株C-17及D-19都可以通过竞争、排除、置换三种方式减少金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌对16-HBE细胞的黏附,并且经0.25 mg/ml胰蛋白酶、5 mol/l Licl、60 mg/ml高碘酸钠处理后,同对照组相比,金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌对16-HBE细胞的黏附能力显著增加（P＜0.05）。结论（1）菌株C-17及D-19的自动聚集能力、疏水性、形成生物膜的能力、黏附性能四者具有正相关,通过这些指标评估了它们体外黏附能力的大小,即两株菌对16-HBE细胞黏附能力都相对较高。（2）菌株C-17及D-19对16-HBE细胞的黏附会受到时间、自身菌体浓度、酸碱度、生长阶段、温度、菌体表面成分的影响,它们的菌体代谢产物对其黏附16-HBE细胞并无影响。（3）菌株C-17及D-19均可以通过竞争、排除、置换三种方式来抑制金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌对16-HBE细胞的黏附。同时,它们的表面相关蛋白及多糖成分在其黏附过程中发挥了重要的作用。
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