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内毒素血症是引起人、畜各种器官功能障碍而最终导致死亡的临床危症之一。该症发生时,各类自由基会大量生成,引发机体的组织细胞发生脂质过氧化作用,机体的抗氧化防御功能也会发生相应的变化。而褪黑素(MT)和氨基胍(AG)都是公认最有效的抗氧化药物。本实验通过对不同处理的山羊肝线粒体进行相关指标测定,揭示内毒素血症发病机制,并探求MT和AG对内毒素血症山羊肝线粒体的保护作用机理,最终为反刍动物内毒素血症的防治提供理论基础。
本实验把72只山羊随机分成生理盐水组、内毒素(LPS)组、MT+LPS组、MT组、AG+LPS组、AG组,每组12只,其中每组又分成静脉注射药物后3h测定与6h测定2个小组。各组山羊在麻醉后立即剖杀取肝脏,一部分肝脏用于提取肝脏线粒体,测定线粒体呼吸功能:呼吸控制率(RCR)以及磷氧比(P/O)、氧化磷酸化效率(OPR),ATP含量的变化,线粒体四个复合体的活性以及ATP酶活性的变化。
结果表明:
1、山羊发生内毒素血症时,LPS组与生理盐水组相比较,肝脏线粒体的RCR、P/O以及OPR 在3h、6h均显著降低(P<0.05);与单纯LPS组相比,MT+LPS组RCR、P/O以及OPR 3h, AG+LPS组RCR、P/O 6h以及OPR3h、6h显著升高(P<0.05),并达到生理盐水组水平(P>0.05);MT组RCR3h,AG组RCR3h、6h和OPR6h明显高于生理盐水组(P<0.05)。提示山羊注射LPS后,肝脏线粒体的呼吸功能降低;MT和AG对山羊肝线粒体具有保护作用,同时可以提高线粒体的呼吸功能。
2、山羊发生内毒素血症时,LPS组与生理盐水组相比较,肝脏线粒体的ATP含量在3h、6h均显著降低(P<0.05)。与单纯LPS组相比,MT+LPS组3hATP含量和AG+LPS组6hATP含量显著升高(P<0.05),但明显低于生理盐水组水平(P<0.05);MT组和AG组高于生理盐水组,但差异不显著(P>0.05)。提示山羊注射LPS后,肝脏线粒体生成ATP的功能降低;MT和AG对山羊肝线粒体具有保护作用功能。
3、山羊发生内毒素血症时,LPS组与生理盐水组相比较,肝脏线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性在3h与6h这两个时间点均显著降低(P<0.05)。线粒体复合体Ⅲ活性在这两个时间点均降低,但差异不显著(P>0.05)。提示山羊注射LPS后,主要引起肝脏线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性降低,线粒体的功能发生紊乱。MT+LPS组和AG+LPS组与单纯LPS组相比,复合体Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ的活性在3h、6h显著升高(P<0.05),尤其复合体Ⅲ和Ⅳ的活性达到生理盐水组水平(P<0.05);MT组和AG组复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ在3h、6h高于生理盐水组,但差异不显著(P>0.05);提示MT和AG对山羊肝线粒体复合体功能具有保护作用,并且主要作用于复合体Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ。
4、山羊发生内毒素血症时,LPS组与生理盐水组相比较,肝脏线粒体在3h与6h这两个时间点复合体Na<+>K<+>-ATP酶、Ca<2+>Mg<2+>-ATP酶的活性均显著降低(P<0.05)。提示LPS可使肝脏线粒体Na<+>K<+>-ATP酶和Ca<2+>Mg<2+>-ATP酶的活性降低。MT+LPS组和AG+LPS组与单纯LPS组相比,Ca<2+>Mg<2+>-ATP酶的活性在3h、6h显著升高(P<0.05),但仍低于生理盐水组水平(P<0.05);MT组和AG组高于生理盐水组,但差异不显著(P>0.05);提示MT和AG对山羊肝线粒体ATP酶活性具有保护作用功能,并且主要作用于Ca<2+>Mg<2+>-ATP酶。
5、就应用MT3h和6h两组的结果比较,3h组各指标都高于6h组;而AG 3h和6h两组的结果比较,6h组各指标普遍都高于3h组;提示山羊静注MT的药效短,6h开始衰减;而AG的药效随时间而增强。就MT和AG的用药效果比较,可见MT+LPS组的肝线粒体3h组的ATP含量和Na<+>K<+>-ATP酶活性明显高于AG+LPS组(P<0.05);AG+LPS的肝线粒体6h组的ATP含量、复合体Ⅳ和Ca<2+>Mg<2+>-ATP酶活性明显高于MT+LPS组(P<0.05);AG组的肝线粒体6h组的ATP生成量明显高于MT组(P<0.05)。推测AG的药效比MT好。