【摘 要】
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该文以表达在Sf9昆虫细胞中的人μ阿片受体(HμOR)为模型,研究了HμOR的二聚化、内吞及再循环作用机制.结果显示:(一)在Sf9昆虫细胞中高效表达了HμOR-6His融合受体蛋白,采用
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该文以表达在Sf9昆虫细胞中的人μ阿片受体(HμOR)为模型,研究了HμOR的二聚化、内吞及再循环作用机制.结果显示:(一)在Sf9昆虫细胞中高效表达了HμOR-6His融合受体蛋白,采用Ni-NTA树脂新的亲和层析技术,纯化了HμOR-6His,SDS-PAGE及抗6His抗体免疫印迹显示分子量约为65kDa;(二)证实细胞中表达的HμOR-6His存在二聚体形式,约为130kDa,二聚体可能通过共价键形式结合,但与膜外二硫键无关;(三)高选择性μ激动剂羟甲芬太尼(Ohm)、DAMGO以及Morphine、广谱型激动剂Etorphine均能降低HμOR的二聚化作用.Ohm呈剂量和时间效应依赖关系引起HμOR二聚体的解聚,拮抗剂Naloxone能反转Ohm的这一效应.(四)Ohm、DAMGO和Morphine均可诱导HμOR的内吞,百日咳毒素(PTX)敏感的Gi/o蛋白介导这一过程,且受体内吞与HμOR二聚体解聚作用相关,Ohm引起的二聚体解聚作用触发了受体的内吞过程,内吞作用滞后于二聚体的解聚过程.(五)在受体再循环过程中不同μ激动剂具有不同的作用模式:Ohm和Morphine使内吞的受体完全再循环至胞膜上,而DAMGO只能使内吞的受体部分再循环至胞膜.该工作对于进一步研究μ阿片受体的结构功能、探讨阿片作用机制及阿片受体介导的信号传导具有重要的理论意义.
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