三种中药分子对卵巢癌UACC-1598细胞中双微体去除作用的研究

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目的:基因扩增是肿瘤发生与演进过程中常见表型,而双微体(doubleminutes,DMs)是基因扩增的两种主要形式之一。双微体上所携带的原癌基因和耐药基因为肿瘤细胞提供生存优势与耐药特性。因此,本研究希望通过使用低浓度中药分子诱导降低细胞中双微体数量,检测含不同数目双微体肿瘤细胞对中药分子敏感性。  方法:首先选取卵巢癌UACC-1598中含双微体多(数目)的4号细胞和含双微体少(数目)的59号细胞作为研究对象。通过实验确定中药分子对UACC-1598细胞诱导去除双微体的适宜作用浓度和最佳作用时间。为了对比两种细胞的生长速度、成瘤能力、迁移能力和细胞周期的改变,我们应用MTT、克隆形成实验、细胞划痕实验和流式细胞术,对双微体在细胞功能上的影响进行比较。  结果:通过MTT绘制生长曲线筛选出三种中药分子较合适的浓度分别为,10-羟基喜树碱:0.001μg/ml;苦参碱:0.03125μg/ml;紫杉醇:5×10-5μg/ml;用以上浓度培养含双微体多的1598-4细胞和含双微体少的1598-59细胞,实时定量PCR结果显示1598-4细胞在以上三种中药分子药物浓度分别作用3周、2周、1周后,细胞中双微体所携带扩增基因EIF5A2和MYCN的扩增水平和转录水平与对照相比有了明显的下降;且中期染色体核型制备后双微体计数,结果显示双微体数目明显减少(P<0.001);经中药分子诱导后,含双微体较多的1598-4与含双微体较少的1598-59相比,细胞成瘤能力明显降低,细胞周期的G2期发生明显阻滞。  结论:3种中药分子均能有效去除卵巢癌UACC-1598细胞系中的双微体,含不同数目双微体细胞肿瘤中对中药分子药物敏感性存在差异,含双微体较多细胞对中药分子更加敏感。
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