论文部分内容阅读
卵巢癌是严重威胁女性生理健康的恶性肿瘤,由于卵巢特殊的解剖位置,加上卵巢癌缺乏典型的临床表现,一般确诊后的患者大部分已经处于晚期。为了发现卵巢癌早期诊断方法,指导临床及时制定合理有效的治疗方案、提高患者生存率,因此在分子生物学水平研究卵巢癌的发生、发展具有重要的临床意义。基因扩增(gene amplification)是特定的DNA拷贝数的增加,是癌基因活化的主要方式。癌基因扩增及过表达与肿瘤发生、演进及预后关系密切。双微体是一可自主复制、额外的环状染色体,是癌基因的主要扩增形式之一,在多种类型的肿瘤细胞系中都有发现,主要参与细胞增殖,或为细胞生长提供选择优势。本实验室前期利用Array-CGH筛选出卵巢癌细胞系UACC-1598中存在核糖体蛋白基因RPL22L1过表达,因此,本研究采用分子生物学、细胞遗传学等检测方法,从细胞生物学功能方面入手,探究了高扩增基因RPL22L1与双微体的关系,及其对卵巢癌发生、发展、转移的影响,旨在为其临床应用提供有益的理论依据。 应用荧光原位杂交技术(FISH)技术初步研究RPL22L1基因与双微体的关系,检测该基因是否定位于双微体上。通过基因工程技术,构建RPL22L1基因真核表达载体,转染入RPL22L1低表达的卵巢癌细胞系SKOV3中。应用Real-time PCR、Western印迹技术验证SKOV3细胞转染后RPL22L1 mRNA及蛋白水平转染效果。通过绘制细胞生长曲线、流式细胞术分析细胞周期、划痕实验、基底膜侵袭实验等体外实验方法,分别对RPL22L1基因转染前后的SKOV3细胞进行检测。同时,合成pSuper-shRNA-RPL22L1质粒转染入人卵巢癌细胞系UACC-1598中封闭中RPL22L1的表达。同样应用Real-time PCR、Western印迹技术检测UACC-1598中RPL22L1的封闭效果。应用相同的体外实验方法检测RPL22L1表达沉默前后UCAA-1598的生物学行为变化。 FISH结果显示高扩增基因RPL22LI位于双微体上。转染了RPL22L1的SKOV3细胞较未转染组生长加快,细胞复制加快,处于增殖期的细胞(S+G2)数量较未转染组增多,细胞的侵袭能力增强。与此同时,转染了pSuper-shRNA-RPL22L1的UACC-1598细胞与对照组细胞相比,生长速度缓慢,发生了G1期阻滞,向G2期转化受到抑制,封闭后的细胞侵袭能力有所下降。 综上所述,过表达的RPL22L1基因定位于双微体上,作为一候选癌基因RPL22L1在卵巢癌的发生、发展及转移过程中发挥重要作用。