【摘 要】
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以乙脑疫苗株SA14-14-2的DNA-based复制子质粒和YF-17D prME基因为基础,构建新型人工JEV-YFV嵌合病毒,评价该嵌合病毒作为黄热病毒减毒活疫苗的抗原性和免疫原性。利用DNA-ba
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以乙脑疫苗株SA14-14-2的DNA-based复制子质粒和YF-17D prME基因为基础,构建新型人工JEV-YFV嵌合病毒,评价该嵌合病毒作为黄热病毒减毒活疫苗的抗原性和免疫原性。利用DNA-based双质粒系统,把SA14-14-2的prM-E基因用YF-17D的prM-E基因进行替换,构建SA14-14-2和YF-17D疫苗株的嵌合型cDNA克隆,转染细胞获得JEV-YFV嵌合病毒。采用噬斑法、鉴定实验、免疫学实验、动物实验等对获得的拯救病毒进行生物学特性研究和疫苗有效性评价。JEV-YFV嵌合型cDNA转染Vero细胞后,获得拯救病毒,病毒滴度达到1.39×107PFU/mL,噬斑呈现“针尖”样,与YF-17D噬斑大小形态相近,但略小于SA14-14-2产生的噬斑。血清学方法鉴定证实为乙脑／黄热病毒嵌合病毒,命名为rYJ。通过免疫学实验、神经毒性实验、攻毒等实验,发现rYJ和YF-17D对3-4周龄Balb/c小鼠均无神经外毒性,有相似的神经内毒性。rYJ免疫后小鼠血清抗体阳转率达到100%,中和抗体滴度达到>1：40,与YF-17D基本相同,用100000 LD50 YFV进行攻毒,rYJ免疫组和YF-17D免疫组均达到100%的保护效力。rYJ嵌合病毒的成功构建进一步支持了SA14-14-2成为新型疫苗载体的可能性,作为YFV减毒疫苗株,其具有良好的的抗原性和免疫原性,但是出于疫苗安全性考虑,我们可以对病毒的包膜E区进行改造,进一步降低对戒奶小鼠的神经内毒性,研制比现用疫苗YF-17D毒性更小的新型疫苗。
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