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本文利用基因工程技术，建立了草菇的农杆菌遗传转化体系，为草菇的基因改良、基因组功能研究提供了技术平台。以草菇菌丝为研究对象，农杆菌为介导，将含抗冷冻蛋白基因(afp)的双元载体(pAg-afp235和pLg-afp235)遗传转化草菇，经过0℃低温筛选，PCR、Southern杂交分子检测技术验证，获得了无抗性标记的耐寒转基因草菇，并对转基因草菇做了生物学特性研究。研究内容及结果如下：
1.草菇外植体的确定。通过制备和比较草菇四种外植体的转化效果，确定了农杆菌浸染草菇的最佳外植体是草菇菌丝球；
2.草菇的农杆菌遗传转化体系的建立。确定了草菇转化的浸染时间为20～30min，农杆菌菌液O.D.值为0.6～0.8，共培养时间为3～4 d，脱菌方式为头孢(Cef)和羧苄青霉素(Cb)终浓度为200 mg/L的夹层脱菌方式；
3.草菇转化子的筛选。切取在筛选培养基上生长的草菇菌丝置于0℃低温处理48 h～72 h后，筛选获得了83个拟转化子；
4.草菇转化子的鉴定。经过PCR.扩增，Southern杂交分析，结果表明了1个pAg-alp235转化子的基因组已经整合进了外源afp基因，且为单拷贝插入；2个pLg-afp235转化子基因组已经整合进了外源afp基因，其中一个为单拷贝插入，另一个为双拷贝插入；
5.转基因草菇培养液抗冻蛋白活性的检测。检测结果表明：转基因草菇培养液具有明显的抗结冰效果，说明整合进草菇基因组的afp基因表达出了有活性的抗冷冻蛋白；
6.转基因草菇的耐低温测试。结果表明：在0℃低温处理下，转基因草菇TV23-1比对照延迟了60 h死亡，TV23-5比对照延迟了36 h死亡，FV23-6比对照延迟了72 h死亡；
7.转基因草菇的生物学特性观察。转基因草菇在PDSA培养基上厚垣孢子增多，菌丝颜色变深，其生长速度快于对照菌株；而在栽培培养基上的生长速度却慢于对照菌株；经过出菇实验，转基因草菇和对照菌株一样，均有子实体发育能力，正常出菇，且子实体形态正常。