苦瓜多糖的提取纯化及体外免疫活性初探

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本文以苦瓜为原料,采用热水浸提法获得粗多糖,通过单因素实验及四元二次旋转回归组合设计优化实验,确定出最佳提取工艺条件。通过对苦瓜粗多糖脱蛋白、透析、DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100凝胶柱层析等步骤,确定了其分离纯化的参数条件。对苦瓜多糖纯品进行了纯度鉴定、分子量测定、糖苷键分析及体外免疫活性验证,初步探讨了苦瓜多糖与免疫的构效关系。主要实验结果如下: 1.苦瓜不同品种、组织部位多糖含量的比较分析:建立了一种适于大群体量多糖含量的测定方法,并对53个不同的苦瓜品种、4个不同的组织部位中多糖含量进行测定。结果表明:该测定方法简便、精确、结果可靠。不同品种的苦瓜多糖含量存在显著差异,以广东槟114-1、丰绿、GDI10、GDI15、碧绿二号、GDI7、GDI14、玉银等苦瓜品种的多糖含量较高,达10%以上;苦瓜不同组织部位中的多糖含量存在显著差异,以苦瓜肉中的多糖含量最高,其次为苦瓜籽,最次为苦瓜叶和苦瓜茎。 2.苦瓜粗多糖提取工艺的优化研究:在单因素实验基础上通过二次旋转回归组合设计实验,对苦瓜粗多糖的提取工艺条件进行了优化。结果表明:苦瓜粗多糖的最优提取条件为:提取温度96℃,pH值7.5,水料比27:1,提取时间230min,在此条件下苦瓜粗多糖提取率为13.29%。苦瓜粗多糖提取率的影响因素依次为:提取温度、pH值、水料比、提取时间。 3.苦瓜多糖的分离纯化及其特性研究:苦瓜粗多糖经分离纯化获得了9个苦瓜多糖组分,对其中MCP4、MCP5-b、MCP6-a、MCP6-b的4个组分进行了结构的初步研究。结果表明:这4个组分均具有典型的多糖特征吸收峰;MCP4、MCP5-b、MCP6-a、MCP6-b为相对均一的多糖组分,其分子量分别为45397、74416、157050、10134Da;经鉴定,这些多糖组分均不含淀粉、游离蛋白质等杂质。 4.苦瓜多糖不同分子量的免疫调节活性研究:主要通过脾淋巴细胞增殖实验,比较苦瓜粗多糖及其纯品组分的免疫活性,并探求免疫活性多糖与分子量之间的关系。结果表明:苦瓜粗多糖具有双向免疫调节作用,MCP4和MCP6-a具有显著的脾淋巴细胞增殖作用。
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