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目的:(1)分析2岁儿童口腔菌斑中变链菌的检出率与乳牙高发龋的关系。(2)分析变链菌蔗糖依赖性黏附能力与乳牙高发龋的关系。(3)了解变链菌srtA基因突变情况,并探讨srtA基因多态性与乳牙高发龋的关系。
方法:①对广州市郊花都区入托前体检的2岁儿童394名进行乳牙龋病的流行病学调查,选取龋失补牙数≥5儿童32名作为高龋组;按性别配对,采用简单随机抽样方法在无龋儿童中抽取32名作为无龋组对照。②采集高龋无龋儿童前牙菌斑,应用形态学、生理生化学方法对其牙菌斑中变链菌进行分离鉴定。③采用分光光度比浊法,检测高龋儿童和无龋儿童变链菌临床分离株对玻壁的黏附情况。④随机选取高龋组和无龋组临床分离株变链菌各15株作为srtA基因遗传多态性的研究对象。提取临床分离菌株变链菌基因组DNA,设计引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增包含srtA基因的片断,将纯化的PCR产物进行测序,运用BioEdit软件分析变链菌srtA基因突变情况,SPSS13.0软件分析乳牙高发龋与变链菌srtA基因多态性的关系。
结果:(1)64名儿童中变链菌的检出率为56.3%,高龋组儿童变链菌检出率(75.0%)显著高于无龋组儿童(37.5%),差异有统计学意义(P<0.05)。生化鉴定获得高龋儿童75株和无龋儿童34株变链菌临床分离株。(2)在含1%蔗糖的培养基中,高龋组变链菌分离株对玻壁的黏附比为0.58±0.15,略高于无龋组0.56±0.13,但两组间差异无统计学意义。(3)30株变链菌临床分离株均扩增出包含srtA基因的片段,BioEdit软件分析结果显示变链菌srtA基因741bp已测出,没有碱基的插入与缺失。(4)以变链菌标准菌株UA159作为对照,BioEidt软件分析结果显示,在已测序的30株临床分离株变链菌srtA基因中有20个碱基突变位点,即发生在23、34、36、47、78、99、112、114、150、165、168、176、186、222、249、261、312、470、636、671位碱基上。(5)20个突变位点中有10个位点属于同义突变,即78、99、150、165、186、222、249、261、312、636位碱基。其余10个碱基位点属于错义突变,即23、34、36、47、112、114、168、176、470、671位碱基,x2检验结果显示各突变位点在高龋无龋组间的差异均没有统计学意义。
结论:①2岁儿童变链菌检出率与高发龋相关。②未见2岁儿童变链菌蔗糖依赖性黏附力与龋病高发相关。③30株临床分离株变链菌srtA基因中存在20个突变位点,其中发现23、34、36、47、112、114、168、176、470、671位10个碱基错义突变位点。④未发现变链菌srtA基因多态性与乳牙高发龋相关。