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本文以柚子内果皮为实验原料,主要进行了以下三个方面的研究:
1.探讨了柚子内果皮主要活性成分--柚皮苷的乙醇提取条件,同时通过测定不同提取条件下N,N-二苯基三硝基苯肼自由基(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH)消除能、N-亚硝基二甲胺(N-nitrosodimethylamine NDMA)体外合成阻断率、亚硝酸盐清除率,探讨了活性成分与各功能活性作用之间的相关性;
2.探讨了超临界二氧化碳萃取技术提取柚子内果皮活性成分的条件。通过比较不同萃取条件对柚皮苷含量的影响,优化实验条件,得到最佳的提取参数;
3.采用大孔吸附树脂分离方法,探讨不同分离条件对柚子内果皮乙醇提取物的分离效果。
柚皮苷的乙醇提取测定结果及二次旋转回归数理统计分析表明:提取温度、提取时间、乙醇浓度、固液比四因素中,乙醇浓度、提取时间和提取温度对柚皮苷的提取量有显著影响。固液比在1:17~1:26、乙醇浓度在75.5%~87.5%、提取时间在3.4h~4.4h、提取温度在48℃~75℃时,提取效果较好,柚皮苷提取量可达到65mg/100g以上。
在活性成分和功能活性作用的相关性分析中,柚皮苷提取量与DPPH消除能、NDMA体外阻断率、亚硝酸盐清除率均有显著相关性。其中柚皮苷提取量与NDMA体外合成阻断率的相关性最为显著,P=0.0000<0.05;其次是亚硝酸盐清除率P=0.0003<0.05;柚皮苷提取量与DPPH消除能也具有较好的相关性,P=0.0178<0.05。
柚皮苷的超临界CO<,2>萃取工艺,分别考察了萃取压力、萃取时间、萃取温度、乙醇浓度、乙醇用量等单因素对萃取效果的影响。采用正交实验设计方法,以柚皮苷含量为指标,优化柚皮苷的超临界CO<,2>萃取工艺,优化条件为:在萃取压力为25Mpa、萃取温度为45℃条件下,以物料质量比1:5(v/w)的90%乙醇萃取3h,得柚皮苷含量为118.85mg/100g。
通过静态吸附-解吸实验从5种大孔吸附树脂中筛选出具有较大吸附量和解析率的D3520树脂为层析柱的填充料,树脂D3520静态吸附量达到12.15mg/g树脂,乙醇沈脱率为73.94%。对柚皮苷的粗提液进行纯化工艺的研究,得到柚皮苷的最佳纯化条件:吸附原液的浓度约为28ug/mL,pH值7;沈脱剂选择pH5 70%乙醇,洗脱剂用量为100mL,沈脱流速为1min/mL。在此条件下得到的洗脱液采用低温冷冻干燥的方法,得到淡黄色粉末。对分离纯化物进行了定性和定量测定。利用颜色反应检验分离纯化物中黄酮属于二氢黄酮类。利用紫外光谱定性分离纯化物具有柚皮苷的吸收光谱特征。利用HPLC定性分离纯化物为柚皮苷,含量为85.66%。